香豆素6膠束的制備及在單層上皮細胞攝取和跨膜轉運研究

2023年12月24日發(作者：美好的一天)

香豆素

6

膠束的制備及在單層上皮細胞攝取和跨膜轉運研究

趙珊珊1a

，張強2

，李靜1a

，周艷秋1b

，單文衛1c

，管潔1b

，張藜莉1a

，趙平1a

( 1.

煤炭總醫院，a.

藥學部，b.

中心實驗室，c.

人事 處; 2.

北京大學藥學院藥劑系，北京

100191)

MDCK)

單層上皮細胞的攝取和跨膜轉運機制。方法 采 摘要:

目的 探討膠束在馬丁達比犬腎( Madin Darby canine Kidney，用溶劑揮發法制備包載熒光探針香豆素

6

的聚乙二醇-聚乳酸( PEG3000

-PLA3000

)

膠束，建立高效液相色譜法測定香豆素

6

含量

Ca的方法，考察空白膠束對香豆素

6

膠束的競爭攝取，考察溫度、抑制劑對膠束在單層馬丁達比犬腎細胞跨膜轉運的影響，2 +

濃度和乙二醇-雙-( 2-氨基乙醚)

四乙酸( EGTA)

的加入對膠束跨膜轉運的影響。結果 膠束可以很快被細胞攝取，膠束的細

胞攝取可被空白膠束競爭抑制。膠束在單層細胞上的跨膜轉運受溫度和抑制劑的影響，說明膠束的跨膜轉運是主動的、能量

依賴性的過程; Ca2 +

濃度和乙二醇-雙-( 2-氨基乙醚)

四乙酸可以影響膠束的跨膜轉運，說明膠束可以經過細胞旁路途徑跨膜

轉運。從單層細胞頂側經跨膜轉運到達基底側的膠束的量相對于加入到頂側的膠束量非常少。結論 膠束在馬丁達比犬腎

單層細胞上的跨膜轉運是細胞旁路途徑和經細胞途徑的結合。

6;

上皮細胞;

攝取;

跨膜轉運 關鍵詞:

膠束;

香豆素

doi: 10. 11669 / cpj. 2014. 10. 014

中圖分類號: Ｒ944

文獻標志碼: A 2494( 2014) 10 － 0858 － 06 文章編號: 1001 －

Preparation of Coumarin 6 Micelles and Uptake and Transport Study of Micelles Across Epithelial Cell

Monolayer

1a

ZHAO Shan-shan，ZHANG Qiang，LI Jing，ZHOU Yan-qiu，SHAN Wen-wei，GUAN Jie，ZHANG Li-

li，ZHAO Ping( 1a. Pharmacy Department，1b. Central Lab，1c. Personnel Section，China Meitan General Hospital，Beijing

100028，China; 2. Department of Pharmaceutics，School of Pharmacy，Peking University，Beijing 100191，China)

1a

1a 2 1a 1b 1c 1b

ABSTＲACT: OBJECTIVE To investigate the uptake and transport properties of micelles across Madin Darby canine kidney ( MD-

CK) cells. METHODS Coumarin 6 loaded PEG-PLA ( PEG3000

-PLA3000

) micelles were prepared by solvent evaporation method，and

the HPLC determination method of coumarin 6 was constructed. Competition uptake of blank micelles with coumarin 6 micelles was

studied. Temperature and inhibitors effect on transport of micelles across MDCK cell monolayer were studied，the concentration of Ca2 +

and EGTA were also studied. ＲESULTS Coumarin 6 micelles could be internalized into cells very quickly，and the uptake of mi-

celles could be inhibited by blank micelles. The transport of micelles was affected by temperature and inhibitors，which means that this

process is an active and energy-dependent process. The concentration of Ca2 +

and EGTA could affect the transport of the micelles，

which means micelles could transport across the cell monolayer via paracellular pathway. The amount of transported coumarin 6 micelles

was rather limited compared with coumarin 6 micelles added to the apical side. CONCLUSION

cell monolayer via both paracellular and transcellular pathway at the same time.

KEY WOＲDS: polymeric micelle; coumarin 6; epithelial cells; uptake; transport

Micelles transport across MDCK

聚合物膠束( polymeric micelles)

是近年來藥劑

學研究中一類新型的納米藥物傳遞系統。膠束由具

有親水性片段和疏水性片段的聚合物在水溶液中自

發形成，其粒徑一般小于

100 nm，具有特別的“核-

［1-2］。由于聚合物膠束 殼”結構，屬熱力學穩定系統具有粒徑小，能夠包載難溶性藥物以及提高藥物的

對于納米藥物傳遞系統，上皮細胞所構成的單

層細胞一般是其能否順利到達靶部位的第一道屏

障［4］，如血腦屏障、胎盤屏障、皮膚屏障等。因此研

究納米藥物傳遞系統與極性單層上皮細胞的作用機

制具有重要意義。現有關于膠束的攝取和跨膜轉運

機制的研究較少。由于膠束本身是非電子密度物

質，因此無法用電子顯微鏡等直接觀察其與細胞作

用的機制。近年來發展起來的熒光探針技術在藥

穩定性，使藥物控釋釋放，提高藥物的生物利用度等

特點［3］，膠束成為藥劑學研究的熱點。

15)

資助項目 基金項目:

煤炭總醫院院級科研課題( 2013-作者簡介:

趙珊珊，女，博士，主管藥師

研究方向:

藥劑學與臨床藥學

Tel: ( 010) 64667755-2127 E-mail: dorvs@ 163. com

·858·

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10 2014

年

5

月第

49

卷第

10

期 中國藥學雜志

學、細胞生物學的機制研究方面等應用較多，本實驗

利用熒光探針香豆素

6，通過不改變膠束本身性質

的物理包載方法標記膠束，利用香豆素

6

能夠定量

測定和定性觀察的特點，對膠束與馬丁達比犬腎

( Madix Darby canine kidney，MDCK)

單層上皮細胞

的攝取和跨膜轉運作用機制做系統的研究。

1

儀器和試劑

1. 1

儀器

激光 粒 度 分 布 儀

( Malvern Zetasizer Nano ZS，

英國馬 爾 文 公 司) ;

高 效 液 相 色 譜 儀

( ＲF-10 AXL，

日本 島 津 公 司

) ;

跨 膜 電 阻 測 定 儀

( Millicell-EＲS，

美國

Millipore

公司) ; Biorad 680

酶標儀(

美國

Bio-

rad

公 司

) 。

激光共聚焦掃描顯微鏡

( Leica TCS

SP5 ，德國海德堡公司

) ; JEM200 CX

型 透 射 電 鏡

(

日本

JEOL

公司) 。

1. 2

試劑

聚 乙 二 醇-聚 乳 酸

( PEG3000

-PLA3000

，Mw

/ Mn

=

1. 19，Advanced Polymeric Materials

公 司，加 拿 大) 。

香豆素

6 ( Coumarin 6，Sigma-Aldrich

公 司，美 國

) ，

DMEM( Dulbecco's modified Eagle’s medium)

高糖培

養基、胎牛血清( fetal bovine rum，FBS) ( Invitrogen

公 司，美 國

) 。 Hoechst 33258、羅 丹 明-鬼 筆 環 肽

( rhodamine-phalloidin ) ( Molecular Probes

公 司，美

國) 。氯丙嗪和甲基-貝塔-環糊精( MβCD，Sigma

公

司，美國) 。Transwell ( 12

孔，孔徑

3

μm，聚碳酸酯

膜，Corning Costar

公司，美國) 。BCA

蛋白定量試劑

盒(

普利萊公司) 。其余試劑均為分析純。

1. 3

細胞

MDCK

細胞(

中國醫學科學院細胞中心，實驗中

所用的細胞傳代數為

29 ～ 34

代) 。

2

方 法

2. 1

包載香豆素

6PEG-PLA

膠束的制備和表征

香豆素

6

膠束由溶劑揮發法制備。0. 1 mg

香

豆素和

PEG3000

-PLA3000

10 mg

溶于乙腈中，在

60 ℃

減壓旋轉蒸發

30 min。在

60 ℃

時加入

pH 7. 4

的

Hepes

緩沖液( Hepes buffered saline，HBS)

后超聲

2

min

則形成膠束溶液［5］。然后將膠束溶液通過

0. 22

μm

的微孔濾膜即得澄清的膠束溶液。用激光粒度

分布測定儀測定膠束的粒徑分布。同法制備未包載

香豆素

6

的空白膠束。

2. 2 MDCK

細胞的培養

MDCK

細胞的培養基為 添 加

10% FBS

的

DMEM

高糖培養基。MDCK

細 胞 以 每 孔

1 × 106

的

細胞密度接種到

Transwell

供給池的膜上，分化生長

7 d。用跨膜電阻儀測定單層細胞跨膜電阻，當單層

細胞的電阻值

＞ 250

Ω

· cm2

時就形成了致密的單

層細胞［6-7］。

2. 3

香豆素

6

的高效液相色譜法含量測定

香豆素

6

的含量測定采用高效液相色譜法［8］，

流動相為甲醇-水( 95 ∶ 5 ) 。激發波長

467 nm，發射

波長

502 nm。柱溫:

室溫。流速: 1. 0 mL · min

－ 1

。

進樣量: 20

μL。

2. 4

膠束的細胞攝取實驗

2. 4. 1

激光共聚焦顯微鏡實時觀察膠束的細胞攝

取 在

MDCK

細胞中加入膠束后

37 ℃

孵 育 并 計

時，在激光共聚焦顯微鏡下觀察細胞中的綠色熒光

強度。

2. 4. 2

空白膠束的競爭攝取實驗

MDCK

細胞在

與

0. 25 mg·mL

－ 1

包載香豆素

6

的膠束孵育的同時

加入

2

到

8

倍濃度的空白膠束，37 ℃

孵育

1 h

之后，

用高效液相色譜法測定細胞中香豆素

6

的含量，細

胞蛋白定量采用

BCA

試劑盒測定。香豆素

6

的細

胞攝取量以香豆素

6

量( ng) /

蛋白質量(

μg)

表示。

2. 4. 3

透射電鏡觀察細胞 細胞用等滲的

PBS

洗

滌

2

次，用戊二醛固定后，再依次進入

1%

四氧化鋨

和

1%

醋酸雙氧鈾溶 液，脫水處理后用環氧樹脂

Epon

包埋，薄層切片后用

1%

醋酸雙氧鈾染色，在透

射電鏡下觀察

MDCK

細胞。

2. 5

香豆素

6

膠束的跨膜轉運實驗

實驗前首先用

37 ℃

預熱的

pH 7. 4

的

Hank' s

平衡鹽溶液( Hank's Balanced Salt Solution，HBSS)

洗

滌細胞單層

3

次，再加入預熱的

HBSS

溶液，于

37

℃

搖床中孵育

30 min，吸棄

HBSS

溶液。將膠束溶

液

500

μL

加到頂側作為供給池，同 時 基 底 側 加

入空 白 的

pH 7. 4 HBSS

溶 液

1. 5 mL

作 為 接 收

池。把加好 膠 束 溶 液 和 空 白

HBSS

溶 液 的

Tran-

swell

培養板 置 于 轉 速 為

50 r · min

－ 1

的

37 ℃

恒

溫搖 床 中，分 別 在

0. 5 、1 、1. 5 、2 h

時 吸 取 供 給

池、接收池溶 液 各

200

μL，同 時 補 足 相 應 體 積 和

溫度的

HBSS

溶液。

香豆素

6

在

MDCK

單層細胞上的累積滲透量

Q = (

ρ

× V + Σ

i = n － 1

ρ

V ) / A。其中，ρ 為樣點測得的藥物濃n n = 1

第

n

個取

度(

i in

g·mL

－ 1

) ，ρ 為n

第

i

個取樣

點測的藥物濃度( ng·mL

－ 1

) ，V

為接收池液體i

體積

1. 5 mL，Vi

為取樣體積

200

μL; A

為滲透面積，本實

驗所用十二孔

Transwell

每孔供給池聚碳酯膜面積

為

1. 13 cm2

。

表觀滲透系數( apparent permeability coefficient，

［9］

Papp

)

值按公式

Papp

= dQ / dt × 1 / A × 1 /

ρ0

。Papp

單

位為

cm·s

－ 1

。ρ

0

是香豆素

6

在頂側的初始濃度，單

位為 μg·mL

－ 1

。

2. 5. 1

溫度和抑制劑對膠束跨膜轉運的影響 為

了研究溫度對膠束跨膜轉運的影響，同濃度的香豆

素

6

膠束分別在

37

和

4 ℃

下進行

2 h

的跨膜轉運

實驗。2 h

之后計算比較

2

種條件下香豆素

6

累積

滲透 量。同 法 進 行

37 ℃

下相同濃度的香 豆 素

6

HBSS

混懸液的跨膜轉運實驗。

氯丙嗪［10］可以抑制網格蛋白介導的胞吞作用，

甲基-貝塔-環糊精［11］可以抑制細胞質膜微囊介導的

胞吞作用。相同濃度的香豆素

6

膠束分別在這

2

種

抑制劑存在的情況下進行

2 h

的跨膜轉運實驗，根

據香豆素

6

的累計滲透量以探討膠束進入細胞的

途徑。

2. 5. 2

乙二醇-雙-( 2-氨基乙醚)

四乙酸［glycol-bis-

( 2-aminoethylether ) -N，N，N'，N'-tetraacetic acid，EGTA］對膠束跨膜轉運的影響

EGTA

為鈣鎂離子

螯合劑，在

Transwell

供給池和接收池分別加入含有

1，5，10 mmol · L

－ 1

Ca2 +

的含鈣鎂離子

HBSS

溶液

(

簡稱為

HBSS1，HBSS5，HBSS10) ，在

37 ℃

孵育

30

min

后，保持

EGTA

濃度不變，在供給池加入相同濃

度的香豆素

6

膠束，經過

2 h

的

Transwell

跨膜轉運

［12-13］

實驗后比較其與對照組的

Papp

值

。對照組的膠

束濃度與

3

個實驗組一致，唯一區別是溶劑為含有

2. 5 mmol·L

－ 1

的

EGTA

無鈣鎂離子

HBSS

溶液。

2. 5. 3

激光共聚焦顯微鏡觀察香豆素

6

膠束跨膜

轉運后的單層細胞 跨膜轉運實驗結束后，細胞用

3. 7%

的多聚甲醛固定后，分別用

Hoechst 33258

和

羅丹明-鬼筆環肽與細胞孵育以標記細胞核(

藍色熒

光)

和微絲(

紅色熒光) ，在激光共聚焦顯微鏡下觀

察細胞的染色情況。

3

結 果

3. 1

香豆素

6

膠束的性質

本實驗制得的香豆素

6

膠束從外觀上看為有綠

色熒光的澄清液體，測得膠束的粒徑為

45. 93 nm，

多分散系數為

0. 196。香豆素

6

在膠束中的含量百

分比為

0. 2% 。2 h

內香豆素

6

從膠束中的泄漏低

于

2. 0% 。空白膠束的粒徑為

45. 55 nm，多分散系

數為

0. 191，見圖

1。

3. 2

香豆素

6

的高效液相色譜法含量測定

·860·

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10

香豆素

6

的保留時間為

5. 8 min，色譜峰尖銳而

對稱

(

圖

2 ) 。

膠束的聚合物載體材料

PEG3000

-

PLA3000

本身無熒光，對香豆素

6

的高效液相色譜測

定干擾較小。香豆素

6

在

0. 5 ～ 10 ng ·mL

－ 1

內峰

面積與濃度的線性關系良 好，標 準 曲 線 為

A =

6. 212 8ρ

－ 0. 163 3 ( r2

= 0. 999 8 ) 。香豆素

6

的精

密度和回收率均符合要求。

3. 3

膠束的細胞攝取實驗

3. 3. 1

激光共聚焦顯微鏡實時觀察膠束的細胞攝

取 香豆素

6

膠束一旦加入到細胞上層，就立刻被

活細胞攝取(

圖

3) 。細胞內很快充滿了綠色熒光。

70 s

時細胞內的綠色熒光強度幾乎達到飽和。但膠

束不能進入細胞核。

圖

1

香豆素

6

膠束( A)

和空白膠束( B)

的粒徑分布圖

Fig. 1 Size distribution of coumarin 6 micelles ( A) and blank

micelles ( B)

圖

2

香豆素

6

的高效液相色譜圖

A －

香豆素

6; B －

香豆素

6

膠束; C －

香豆素

6

膠束在細胞樣品中

Fig. 2 HPLC Images of coumarin 6

A － coumarin 6; B － coumarin 6 micelles; C － coumarin 6 micelles in cell samples

中國藥學雜志

2014

年

5

月第

49

卷第

10

期

3. 3. 2

空白膠束的競爭攝取實驗 在香豆素

6

膠

束濃度相同的情況下，包載香豆素

6

膠束的細胞攝

取可被粒徑相似的未包載香豆素

6

的空白膠束競爭

抑制，說明香豆素

6

沒有影響膠束本身的性質

(

圖

1

4) 。隨著空白膠束濃度的增加(

從

0. 5、1 mg·mL

－

－ 1

增加到

2 mg·mL

) ，香豆素

6

膠束的細胞攝取逐

0. 022、0. 017 ng

降 漸減少，從每

1

μg

蛋白質

0. 053、37 ℃ 2 h

內

1 mg ·mL

的膠 轉運量都非常少，下，1. 49% 。香豆素

6

束的跨膜轉運量僅有膠束總量的

相比不 加 抑制劑的香豆素

6

膠 束

2 h

時 的

－ 1

2 h

時僅有

0. 088% 。

混懸液的跨膜轉運量非常少，1. 16%

的跨膜轉運量，氯丙嗪作用下膠束的跨膜轉

運量僅有

0. 16% ，甲基-β-環糊精的跨膜轉運 量 有

7。 丙嗪和甲基-β-環糊精的影響，見圖

3. 4. 2 EGTA

對香豆素

6

膠束跨膜轉運的影響

0. 61% ，說明香豆素

6

膠束的跨膜轉運可以受到氯

至

0. 013 ng

香豆素

6。香豆素

6

膠束細胞攝取的降

低程度與空白膠束濃度增加的倍數不成線性趨勢。

3. 3. 3

透 射電鏡觀察細胞 細胞膜邊緣的囊泡

(

箭頭所指) ，可能是香豆素

6

膠束通過胞吞作用進

入細胞的

2

種途徑即網格蛋白或細胞質膜微囊介導

Ca2 +

的濃度可以對

MDCK

單層細胞的緊密連接造

(

圖

8 ) 。

從 成影 響 圖

8

可 以 看 出，隨 著

HBSS

中

1 － 1

Ca2 +

濃度從

1、5 mg·mL

－

增加到

10 mmol·L

，香

的胞吞作用的囊泡(

圖

5) 。

3. 4

香豆素

6

膠束的跨膜轉運實驗研究

3. 4. 1

溫度對香豆素

6

膠束跨膜轉運的影響 在

37 ℃ ，隨著膠束濃度的增加，膠束的透過速率也隨

之增加，而在

4 ℃ ，膠束的透過速率相比

37 ℃

非常

低(

圖

6) 。但不論是在

37 ℃

還是

4 ℃ ，膠束的跨膜

圖

3

激光共聚焦顯微鏡實時觀察香豆素

6

膠束的細胞攝

取( × 350，標尺

= 20

μm)

Fig. 3 Ｒeal-time CLSM images of cellular uptake of coumarin 6

micelles ( × 350，bar = 20

μm)

圖

4

空白膠束對香豆素

6

膠 束 的 競 爭 細 胞 攝 取．

n = 4，x珋± s

Fig. 4 Competition cellular internalization of blank micelles

with coumarin 6 micelles． n = 4，x珋± s

中國藥學雜志

2014

年

5

月第

49

卷第

10

期

豆素

6

膠束的表觀滲透系數逐漸降低，從

1. 5、0. 8

cm·s

－ 1

降至

0. 5 cm·s

－ 1

。而

EGTA

對打開單層細

胞緊密連接的作用非常 明 顯，在不含鈣鎂離子的

HBSS

中加入

EGTA，膠束的滲透速率(

即

Papp

值)

為

含

1 mmol·L

－ 1

Ca2 +

HBSS

的

3. 6

倍(

含

1 mmol ·

L

－ 1

Ca2 +

的

HBSS

的

P

app

值為

1. 46 cm·s

－ 1

，不含鈣

鎂 離 子 的

HBSS

中 加 入

EGTA

的

Papp

值 為

6. 58 cm·s

－ 1

) 。

圖

5

細胞表面質膜囊泡( × 90 000，標尺

= 0. 1

μm)

Fig. 5 Plasma membrane vesicle ( × 90 000，Bar = 0. 1

μm)

圖

6

溫度對香豆素

6

膠束跨膜轉運的影響． n = 4，x珋± s

Fig.

6 Temperature effect on the transport of coumarin 6 mi-

celles． n = 4，x珋± s

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10

·861·

Fig. 7 Inhibitors effect on the transport of coumarin 6 micelles．

n = 4，x珋± s

圖

8 Ca2 +

濃度和

EGTA

對香豆素

6

膠束跨膜轉運的影響．

n = 4，x珋± s

Fig. 8 Concentration of Ca2 +

and EGTA effect on the transport

of coumarin 6 micelles． n = 4，x珋± s

3. 4. 3

激光共聚焦顯微鏡觀察香豆素

6

膠束的跨

膜轉運 生長在

Transwell

插入池聚碳酸酯膜上的

單層

MDCK

細胞是致密的均勻細胞層，見圖

9。膠

束在單層細胞上跨膜轉運

2 h

之后，單層細胞內滯

留了大量綠色的香豆素

6

膠束。

4

討 論

本實驗選定了激光染料香豆素

6

為熒光探針。

香豆素

6

的熒光量子效率高，被廣泛的用于納米粒

的細胞攝取機制研究中。在香豆素

6

的發射光譜范

圍內，與它同時進行研究的大多數細胞都沒有背景

熒光;

另外有文獻［14］報道，游離的香豆素

6

不能

被某些細胞直接攝取，本實驗圖

5

的結果也說明香

豆素

6

的跨膜轉運量非常少。所有這些優點使得香

豆素

6

可以作為本實驗使用的熒光探針。本實驗采

用物理包載的方式用香豆素

6

標記膠束，相對于通

過化學合成，使熒光探針連接到聚合物上的標記方

法而言，香豆素

6

的加入并不影響膠束本身的性質，

如相對分子質量、表面性質等［15］，而且香豆素

6

代

·862·

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10

圖

9

膠束在

MDCK

單層細胞上跨膜轉運后的激光共聚焦

顯微鏡照片( × 200，標尺

= 40

μm)

Fig. 9 Confocal lar scanning microscope images of micelles

transport across MDCK cell monolayer ( × 200，bar = 40

μm)

表的是膠束本身，而不是膠束的高分子載體材料。

MDCK

細胞系為馬丁達比犬腎上皮細胞發展的

一種有非常緊密細胞間連接的細胞系。MDCK

細胞

具有極性，其基底側貼于瓶底，面向液層有微絨毛形

［16］

成，并形成圓頂

。MDCK

細胞有許多特性和血腦

屏障( blood brain barrier，BBB)

相似，常用于體外藥

物透過

BBB

的篩選模型。在研究主動吸收藥物的

滲透性方面，Caco-2

細胞和

MDCK

細胞之間有很好

的相關性，而且相對于

Caco-2

細胞不同實驗室培養

之間電阻值差異過大的缺點，MDCK

細胞的電阻值

比較穩定。因此

MDCK

細胞也被用于代替

Caco-2

細胞作為腸上皮細胞模型，另外

MDCK

細胞具有相

對較薄的黏液層［17］，有利于直接研究納米給藥系統

與細胞之間的相互作用，而不受細胞表面黏液層的

干擾。

37 ℃

是正常的生理條件，而在

4 ℃

時，主動轉

運的過程會因為缺乏能量而受到抑制。溫度對膠束

跨膜轉運速率的影響說明膠束在單層上皮細胞上的

跨膜轉運是一個主動轉運的過程，是能量依賴性的。空白膠束競爭香豆素

6

膠束的細胞攝取也說明了這

一點。說明膠束是先經過胞吞作用從頂側進入細

胞，經過細胞內一系列的過程，從基底側轉運出細胞

的。粒徑

100 nm

以下的顆粒性物質進入細胞的途

徑有網格蛋白介導的胞吞作用、細胞質膜微囊介導

的胞吞作用等。氯丙嗪和甲基-貝塔-環糊精對膠束

跨膜轉運的抑制作用說明膠束進入細胞的途徑可能

是網格蛋白介導的胞吞作用和細胞質膜微囊介導的

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胞吞作用，圖

5

的透射電鏡照片中出現的細胞表面

質膜囊泡可能就是這

2

種途徑轉運的囊泡。由于這

2

種抑制劑抑制了膠束的細胞攝取，從而導致跨膜

轉運的膠束減少。

上皮細胞緊密連接位于兩相鄰細胞間的頂端，

兩個相鄰細胞的質膜緊靠在一起，外側電子密度高

的部分互相融合，成一單層。一般認為鈣離子濃度

對于維持細胞的緊密連接起著重要作用，如在消化

細胞時，鈣離子的缺失會導致細胞緊密連接的打開。

用

EGTA

螯合鈣鎂離子而打開單層細胞的緊密連接

后，膠束的跨膜轉運速率大大增加，說明膠束是可以

通過細胞間的緊密連接，即細胞旁路途徑跨膜轉

運的。

因此，膠束可能是通過細胞內和細胞間

2

個途

徑［18］實現在緊密連接單層細胞上的跨膜轉運。但

細胞間的緊密連接僅占單層細胞表面積的

1%［19］，

在正常生理條件下，即非打開緊密連接的情況下，通

過緊密連接途徑穿越單層細胞的膠束較少。從圖

3

的結果看，膠束可以很快被細胞攝取，然而從圖

6

的

結果來看，能夠從單層細胞頂側穿越單層細胞，到達

單層細胞基底側的膠束的量相對于加入到頂側的膠

束的量非常少，從圖

9

激光共聚焦顯微鏡的結果看，

大量的膠束滯留在細胞內。膠束在細胞內的穿行轉

運過程有待進一步研究。

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(

收稿日期: 2013-07-26)

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10

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