牛肉膏蛋白胨培養基配方

2024年3月6日發(作者：堅持不懈直到成功)

時間：二O二一年七月二十九日

牛肉膏蛋白胨培養基配方：之邯鄲勺丸創作

時間：二O二一年七月二十九日

牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基,有時又稱為普通培養基.它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl.其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源,磷酸鹽、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供無機鹽.在配制固體培養基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑.瓊脂在經常使用濃度下96℃時溶化,一般實際應用時在滾水浴中或下面墊以石棉網煮沸溶化,以免瓊脂燒焦.瓊脂在40℃時凝固,通常不被微生物分化利用.固體培養基中瓊脂的含量按照瓊脂的質量和氣溫的不合而有所不合.

由于這種培養基多用于培養細菌（葷食）,因此,要用稀酸或稀堿將其pH調至中性或微堿性,以利于細菌的生長繁衍.

牛肉膏蛋白胨培養基的配方如下：

牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、NaCl 5g、瓊脂 15—20g、水

1000ml、pH 7．4—7．6（7.0—8.0）

三、器材

牛肉膏,蛋白胨, NaCl,瓊脂；1mol/L NaOH, 1mol/L HCl；

試管,三角燒瓶,燒杯,量筒,玻棒,培養基分裝器,扭力天平,牛角匙,高壓蒸汽滅菌鍋,pH試紙（ pH 5．5—9．0）,棉花,牛皮紙,記號筆,麻繩,紗布等.

四、操縱步調

1．稱量

時間：二O二一年七月二十九日

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按培養基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中.牛肉膏經常使用玻棒挑取,放在小燒杯或概略皿中稱量,用熱水溶化后倒入燒杯.也可放在稱量紙上,稱量后直接放入水中,這時如稍微加熱,牛肉膏便會與稱量紙別離,然后立即取出紙片.蛋白胨很易吸潮,在稱取時動作要迅速.另外,稱藥品時嚴防藥品混雜,一把牛角匙用于一種藥品,或稱取一種藥品后,洗凈、擦干,再稱取另一藥品,瓶蓋也不要蓋錯.

2．溶化

在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒攪勻,然后,在石棉網上加熱使其溶解.待藥品完全溶解后,彌補水分到所需的總體積.如果配制固體培養基,將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中,再加熱溶化,在瓊脂溶化的過程中,需不竭攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂.最后補足所失的水分.

3．調pH

在未調pH前,先用精密pH試紙丈量培養基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培養基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,并隨時用pH試紙測其pH值,直至pH達7．6.反之,則用1mol/L HCl進行調節.注意pH值不要調過頭,以避免回調,不然,將會影響培養基內各離子的濃度.

對于有些要求pH值較精確的微生物,其pH的調節可用酸度計進行（使用辦法,可參考有關說明書）.

4．過濾

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趁熱用濾紙或多層紗布過濾,以利結果的不雅察.一般無特殊要求的情況下,這一步可以省去（本實驗無需過濾）.

5．分裝

按實驗要求,可將配制的培養基分裝入試管內或三角燒瓶內.分裝裝置見圖Ⅴ-1.

分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染.

(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜.

(2)固體分裝分裝試管,其裝量不超出管高的1/5,滅菌后制成斜面,如圖Ⅴ-2.分裝三角燒瓶的量以不超出三角燒瓶容積的一半為宜.

(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝.

6．加塞

培養基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進入培養基內而造成污染,并包管有良好的通氣性能（棉塞制作辦法附本實驗后面）.

7．包扎

加塞后,將全部試管用麻繩捆扎好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以避免滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道麻繩扎好.用記號筆注明培養基名稱、組別、日期.三角燒瓶加塞后,外包牛皮紙,用麻繩以活結形式扎好,使用時容易解開,同樣用記號筆注明培養基名稱、組別、日期.

8．滅菌

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將上述培養基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2）,121．3℃, 20分鐘高壓蒸汽滅菌.如因特殊情況不克不及及時滅菌,則應放入冰箱內暫存.

9．放置斜面

將滅菌的試管培養基冷至50℃左右,將試管棉塞端擱在玻棒上,放置的斜面長度以不超出試管總長的一半為宜.

10．無菌檢查

將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時,以檢查滅菌是否完全.

PDA培養基配方：

特點及用途

PDA培養基是人們對馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的簡稱,即Potato

Dextro Agar （Medium）,依次對應馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂的英文.

一種經常使用的培養基,宜培養酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌（素食）.酵母菌PH（3.8~6.0）,霉菌（4.0~5.8）等.

按物理性狀劃分：固體培養基,按培養基成分劃分：半合成培養基

配方

馬鈴薯 200克 葡萄糖 20克 瓊脂 15~20克 自來水 1000毫升

自然PH

配制步調

其做法是稱取200g馬鈴薯,洗凈去皮切成小塊,加水煮爛（煮沸時間：二O二一年七月二十九日

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20~30分鐘,能被玻璃棒戳破即 可）,用四層紗布過濾,再據實際實驗需要加葡萄糖和瓊脂,繼續加熱攪拌混勻,稍冷卻后再補足水分至1000毫升,分裝試管,加塞、包扎,（121℃）滅菌20分鐘左右后取出試管擺斜面,冷卻后貯存備用.

其他事項

1.培養基經滅菌后,必須放在37C溫箱培養24h,無菌生長者方可使用.

培養基一般不需要調pH.對于要調節pH的培養基,一般用pH試紙測定其pH.如果培養基偏酸或偏堿時,可用lmol／LNaOH或lmol／LHCL溶液進行調節.調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液,避免局部過酸或過堿破壞培養基成分.

3.培養基在使用時也可以做成不含瓊脂的液體培養基,用于菌類的震蕩培養.

4.培養基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量為0.1g/L培養基,主要是為了抑制細菌的生長,減少攪擾性

高氏1號培養及配方：

培養放線菌用 ,改進的高氏

可溶性淀粉 2g ,KNO3 0.1g ,K2HPO4 0.05g ,MgSO4? 7H2O

0.05g ,NaCl 0.05g ,FeSO4? 7H2O 0.001g （母液）,瓊脂 2g ,自來水 100mL ,pH 7.2～7.4 ,滅菌 1.05kg/cm2,20min

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配制時,先用少量冷水,將淀粉調成糊狀,倒入少于所需水量的滾水中,在火上加熱,邊攪拌邊依次逐一溶化其他成分,溶化后,補足水分到100ml,調pH,121℃滅菌20min.

低溫滅菌后,倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培養基中混勻,將培養基倒入平皿內約15ml/皿.

高氏1號：

可溶性淀粉（20g）,KNO3（1g）,K2HPO4（0.5g）,MgSO4? 7H2O（0.5g）,NaCl（0.05g）,FeSO4? 7H2O（0.01g）,瓊脂

20g,pH=7.4-7.6

和改進的不同就在于有沒有FeSO4? 7H2O 高氏經常配完后釀成褐色也是由于Fe2+氧化為Fe3+的關系,所以經常有人用螯合的FeSO4,避免氧化.

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