培養(yǎng)基怎么滅菌？
高壓滅菌。
滅菌是殺滅培養(yǎng)基中本身的原著菌或在空氣中附著的雜菌，更好的讓目標菌生長(減少雜菌消耗培養(yǎng)基中的營養(yǎng)，而且有些雜菌會抑制目標菌的生長)，一般滅完菌后將培養(yǎng)基放在30-37度的環(huán)境中培養(yǎng)一天，看其有沒有長菌(液體看是否變渾濁，固體看是否長菌落)，即知是否滅菌后為無菌。
擴展資料：
注意事項：
培養(yǎng)基的加熱溶解或高溫滅菌盛放使用的容器不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細菌不易生長。最好使用不銹鋼鍋加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時攪動、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。
培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者）。
參考資料來源：百度百科-培養(yǎng)基
培養(yǎng)基滅菌方法
培養(yǎng)基的滅菌方法
1、高壓蒸汽滅菌：
高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛制備過程中混入各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時一般是在0.105MPa壓力下，溫度121℃時，滅菌15~30min即可。消毒時間不宜過長，也不能超過規(guī)定的壓力范圍，否則有機物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會在高溫下分解，失去營養(yǎng)作用，也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色，甚至難以凝固。將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中，裝水量一般不超過瓶的2/3，用牛皮紙或硫酸紙包扎封口，然后放入高壓鍋中滅菌后即為無菌水。 滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)3d，若無污染現(xiàn)象，則證明滅菌是徹底的，可以使用。暫時不用的培養(yǎng)基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應(yīng)在1周內(nèi)用完，其他培養(yǎng)基最多也不要超過1個月。
2、過濾滅菌：
一些植物生長調(diào)節(jié)劑及有機物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇熱容易分解，不能與培養(yǎng)基一起進行高溫滅菌，而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌。細菌過濾器與濾膜（孔徑0.45微米）使用之前要先進行高壓滅菌。過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中，若為液體培養(yǎng)基，可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時加入；若為固體培養(yǎng)基，必須在培養(yǎng)基凝固之前（50-60℃）加入，振蕩使溶液與其他成分混合均勻。
培養(yǎng)基滅菌方法
1.灼燒滅菌
將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌。此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰灼燒來滅菌。
2.干熱滅菌
將滅菌物品放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃加熱1～2h可達到滅菌的目的。能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。
3.高壓蒸汽滅菌
將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)。把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣徹底排除后，將鍋密閉，繼續(xù)加熱使鍋內(nèi)的氣壓逐步上升，溫度也隨之升到100℃以上。為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15~30
min。
培養(yǎng)基的滅菌流程
原理
培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料.由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型,對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同,加之實驗和研究的目的不同,所以培養(yǎng)基的種類很多,使用的原料也各有差異,但從營養(yǎng)角度分析,培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等.另外,培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓.
瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì),是應(yīng)用最廣的凝固劑.加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98～100℃下融化,于45℃以下凝固.但多次反復(fù)融化,其凝固性降低.
任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時徹底滅菌,以備純培養(yǎng)用.一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌.
3材料
3.1器皿及材料
天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、量筒、刻度搪瓷杯、試管、三角瓶、漏斗、分裝架、移液管及移液管筒、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)皿盒、玻璃棒、燒杯、試管架、鐵絲筐、剪刀、酒精燈、棉花、線繩、牛皮紙或報紙、紗布、乳膠管、電爐、滅菌鍋、干燥箱.
3.2藥品試劑
蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、瓊脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麥芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽計、磷酸銨、5%NaOH溶液、5%HCl溶液.
4流程
稱藥品→溶解→調(diào)pH值→融化瓊脂→過濾分裝→包扎標記→滅菌→擺斜面或倒平板.
5步驟
5.1培養(yǎng)基的制備
5.1.1稱量藥品
根據(jù)培養(yǎng)基配方依次準確稱取各種藥品,放入適當(dāng)大小的燒杯中,瓊脂不要加入.蛋白胨極易吸潮,故稱量時要迅速.
5.1.2溶解
用量筒取一定量(約占總量的1/2)蒸餾水倒入燒杯中,在放有石棉網(wǎng)的電爐上小火加熱,并用玻棒攪拌,以防液體溢出.待各種藥品完全溶解后,停止加熱,補足水分.如果配方中有淀粉,則先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀,并在火上加熱攪拌,然后加足水分及其它原料,待完全溶化后,補足水分.
5.1.3調(diào)節(jié)pH
根據(jù)培養(yǎng)基對pH的要求,用5%NaOH或5%HC1溶液調(diào)至所需pH.測定pH可用pH試紙或酸度計等.
5.1.4溶化瓊脂
固體或半固體培養(yǎng)基須加入一定量瓊脂.瓊脂加入后,置電爐上一面攪拌一面加熱,直至瓊脂完全融化后才能停止攪拌,并補足水分(水需預(yù)熱).注意控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦.
5.1.5過濾分裝
先將過濾裝置安裝好（圖3-1）.如果是液體培養(yǎng)基,玻璃漏斗中放一層濾紙,如果是固體或半固體培養(yǎng)基,則需在漏斗中放多層紗布,或兩層紗布夾一層薄薄的脫脂棉趁熱進行過濾.過濾后立即進行分裝.分裝時注意不要使培養(yǎng)基沾染在管口或瓶口,以免浸濕棉塞, 引起污染.液體分裝高度以試管高度的1/4左右為宜.固體分裝裝量為管高的1/5,半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜；分裝三角瓶,其裝量以不超過三角瓶容積的一半為宜.
5.1.6包扎標記
培養(yǎng)基分裝后加好棉塞或試管帽,再包上一層防潮紙,用棉繩系好.在包裝紙上標明培養(yǎng)基名稱,制備組別和姓名、日期等.
5.1.7滅菌
上述培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中規(guī)定的條件及時進行滅菌.普通培養(yǎng)基為121℃20min,以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份.培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后,如需要作斜面固體培養(yǎng)基,則滅菌后立即擺放成斜面(圖3-2),斜面長度一般以不超過試管長度的1/2為宜；半固體培養(yǎng)基滅菌后,垂直冷凝成半固體深層瓊脂.
5.1.8倒平板
將需倒平板的培養(yǎng)基,于水浴鍋中冷卻到45～50℃,立刻倒平板.
5.2滅菌方法
滅菌是指殺死或消滅一定環(huán)境中的所有微生物,滅菌的方法分物理和化學(xué)滅菌法兩大類.本實驗主要介紹物理方法的一種,即加熱滅菌.
加熱滅菌包括濕熱和干熱滅菌兩種.通過加熱使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)凝固變性,從而達到殺菌目的.蛋白質(zhì)的凝固變性與其自身含水量有關(guān),含水量越高,其凝固所需要的溫度越低.在同一溫度下,濕熱的殺菌效力比干熱大,因為在濕熱情況下,菌體吸收水分,使蛋白質(zhì)易于凝固；同時濕熱的穿透力強,可增加滅菌效力.
5.2.1.高壓蒸汽滅菌法
高壓蒸汽滅菌用途廣,效率高,是微生物學(xué)實驗中最常用的滅菌方法.這種滅菌方法是基于水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設(shè)計的.當(dāng)蒸汽壓力達到1.05kg/cm2時,水蒸氣的溫度升高到121℃,經(jīng)15～30min,可全部殺死鍋內(nèi)物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢.一般培養(yǎng)基、玻璃器皿以及傳染性標本和工作服等都可應(yīng)用此法滅菌（圖3-4）.
5.2.1.1操作方法和注意事項如下
加水
打開滅菌鍋蓋,向鍋內(nèi)加水到水位線.立式消毒鍋最好用已煮開過的水,以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存.注意水要加夠,防止滅菌過程中干鍋.
裝料、加蓋
滅菌材料放好后,關(guān)閉滅菌器蓋,采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋,使蒸汽鍋密閉,勿使漏氣.
排氣
打開排氣口(也叫放氣閥).用電爐加熱,待水煮沸后,水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出,當(dāng)有大量蒸汽排出時,維持5min,使鍋內(nèi)冷空氣完全排凈.
升壓、保壓和降壓
當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時,即可關(guān)閉排氣閥,壓力開始上升.當(dāng)壓力上升至所需壓力時,控制電壓以維持恒溫,并開始計算滅菌時間,待時間達到要求（一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃,20min）后,停止加熱,待壓力降至接近“0”時,打開放氣閥.注意不能過早過急地排氣,否則會由于瓶內(nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶內(nèi)液體沖出容器之外.
滅菌后的培養(yǎng)基空白培養(yǎng)
滅菌后的培養(yǎng)基放于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),經(jīng)24h培養(yǎng)無菌生長,可保存?zhèn)溆茫恍泵媾囵B(yǎng)基取出后,立即擺成斜面后空白培養(yǎng)；半固體的培養(yǎng)基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后,空白培養(yǎng).
5.2.2干熱滅菌法
通過使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌.一般是把待滅菌的物品包裝就緒后,放入電烘箱中烘烤,即加熱至160～170℃維持1～2h.
干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌.凡帶有膠皮的物品,液體及固體培養(yǎng)基等都不能用此法滅菌.
5.2.2.1滅菌前的準備
玻璃器皿等在滅菌前必須經(jīng)正確包裹和加塞,以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染.常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內(nèi)；三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙,用棉繩以活結(jié)扎緊,以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染；吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心,輕輕捅入管口,松緊必須適中,管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過火焰燒去,滅菌時將吸管裝入金屬管筒內(nèi)進行滅菌,也可用紙條斜著從吸管尖端包起,逐步向上卷,頭端的紙卷捏扁并擰幾下,再將包好的吸管集中滅菌.
5.2.2.2干燥箱滅菌
將包扎好的物品放入干燥烘箱內(nèi),注意不要擺放太密,以免妨礙空氣流通；不得使器皿與烘箱的內(nèi)層底板直接接觸.將烘箱的溫度升至160～170℃并恒溫1～2h,注意勿使溫度過高,超過170℃,器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒.如果是為了烤干玻璃器皿,溫度為120℃持續(xù)30分鐘即可.溫度降至60～70℃時方可打開箱門,取出物品,否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂.
用此法滅菌時,絕不能用油、蠟紙包扎物品.
5.2.2.3火焰滅菌
直接用火焰灼燒滅菌,迅速徹底.對于接種環(huán),接種針或其它金屬用具,可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌.此外,在接種過程中,試管或三角瓶口,也采用通過火焰而達到滅菌的目的.
培養(yǎng)基的滅菌流程
培養(yǎng)基的滅菌流程如下：
1、使用前在外層鍋內(nèi)加入適量的水，水量與三角擱架相平；
2、將內(nèi)鍋放在三角擱架上，培養(yǎng)基分裝完畢后將待滅菌的物品放在內(nèi)鍋里，將蓋上的排氣軟管插到內(nèi)鍋的排氣槽內(nèi)，然后將鍋四周的固定螺旋以兩兩對稱的方式旋緊，打開排氣閥；
3、加熱井的同時打開排氣閥，待鍋內(nèi)沸騰并有大量蒸汽自排氣閥冒出時，維持5分鐘以上，然后將排氣閥關(guān)閉；
4、當(dāng)壓力升至0.1兆帕，溫度達到121攝氏度時，維持20到30分鐘后，隔斷熱源；
5、出鍋當(dāng)壓力表降至零處后，打開排氣閥，旋開固定螺旋，開蓋，取出滅菌物；?
6、滅菌完畢取出物品后，將鍋內(nèi)余水倒出，保持內(nèi)壁及擱架干燥，蓋好鍋蓋即可。
培養(yǎng)基為什么要消毒滅菌？
用于生產(chǎn)杏鮑菇、阿魏菇的二級種和栽培的各種原材料都含有大量的微生物群，在干燥的條件下它們均呈休眠或半休眠狀態(tài)。加入水及其他營養(yǎng)后，料內(nèi)微生物和各種侵染性病原菌活動增強，加速繁殖，將基質(zhì)分解，就有可能導(dǎo)致培養(yǎng)基酸敗。滅菌的目的是殺死各種侵染性病原菌，杜絕有害微生物的繁殖，從而給杏鮑菇、阿魏菇的菌絲生長創(chuàng)造有利環(huán)境。而且培養(yǎng)基通過高溫滅菌處理，還會從生料轉(zhuǎn)化為熟料，有利于杏鮑菇、阿魏菇的菌絲吸收利用。如果滅菌不徹底或造成培養(yǎng)基酸敗，將導(dǎo)致接種后雜菌大量污染。
