DNA怎么提取？
DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式：酶法。根據核酸分離純化方式的不同有；硅質材料、陰離子交換樹脂等。
提取DNA總的原則:
1.保證核酸一級結構的完整性；
2.核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；
3.其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到最低程度；
4.其他核酸分子，如RNA，也應盡量去除。
例如 : 用酶法提取
DNA提取分為三個基本步驟，每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及后續步驟的不同而有區別。
工具/原料: 研磨棒、研磨儀或者組織破碎儀 , 氯仿：異戊醇（24:1）或者蛋白酶 , RNA酶 , 酒精 , 冰箱
方法/步驟 :
使用研磨儀、研磨棒或者使用超聲破碎細胞的方法破碎細胞，加入去污劑，如sds等，除去膜脂。
去除細胞內的蛋白質，包括與DNA結合的組蛋白，通過加入蛋白酶，醋酸鹽沉淀，或者酚／氯仿抽提等方法去除。
加入RNA酶去除RNA，如實驗不嚴密，可省略此步。
沉淀DNA，需在冷乙醇或異丙醇中沉淀，放在冰箱-20℃沉淀30分鐘以上，原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起發生沉淀。
總結: DNA提取方法有下面⑦種
一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二.甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
四.異丙醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態）
五.表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應。
七.堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。
如何提取dna
DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.
也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNa對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA.
（2）.陰離子去污劑法:
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA.
（3）.苯酚抽提法:
苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNa的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.離心分層后取出水層,多次重復操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性質,用乙醇沉淀DNA .此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態 .
（ 4）.水抽提法:
利用核酸溶解于水的性質,將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA,然后將沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最后在空氣中干燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.
DNA怎么提取？
就那植物來說吧！原理是一致的。方法不同。
1植物組織提取基因組DNA
一、材料
幼嫩葉子。
二、設備
移液器，冷凍高速離心機，臺式高速離心機，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。
三、試劑
1、提取緩沖液Ⅰ：100mmol/L
Tris·Cl,
pH8.0,
20mmol/L
EDTA,
500mmol/L
NaCl,
1.5%
SDS。
2、提取緩沖液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸鈉，6.0gPVP，240ul巰基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、
RnaA母液
5、其它試劑：液氮、異丙醇、TE緩沖液，無水乙醇、70%乙醇、3mol/L
NaAc。
四、操作步驟：
1.
在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液Ⅰ,
60℃水浴預熱。
2.
幼苗或葉子5-10g,
剪碎,
在研缽中加液氮磨成粉狀后立即倒入預熱的離心管中,
劇烈搖動混勻,
60℃水浴保溫30-60分鐘(時間長,DNA產量高),
不時搖動。
3.
加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液,
顛倒混勻(需帶手套,
防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鐘,
使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。
4.
室溫下5000rpm離心5分鐘。
5.
仔細移取上清液至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫放置片刻即出現絮狀DNA沉淀。
6.
在1.5ml
eppendorf中加入1ml
TE。用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團,在干凈吸水紙上吸干,轉入含TE的離心管中,DNA很快溶解于TE。
7.
如DNA不形成絮狀沉淀,則可用5000rpm離心5分鐘,
再將沉淀移入TE管中。這樣收集的沉淀,往往難溶解于TE,可在60℃水浴放置15分鐘以上，以幫助溶解。
8.
將DNA溶液3000rpm離心5分鐘,
上清液倒入干凈的5ml離心管。
9.
加入5μl
RNaA(10μg/μl),
37℃
10分鐘,
除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。
10.
加入1/10體積的3mol/L
NaAc及2×體積的冰乙醇,混勻,-20℃放置20分鐘左右,DNA形成絮狀沉淀。
11.
用玻棒撈出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干凈吸水紙上吸干。
12.
將DNA重溶解于1ml
TE,
-20貯存。
13.
取2μl
DNA樣品在0.7%
Agaro膠上電泳,
檢測DNA的分子大小。同時取15μl稀釋20倍,
測定OD260/OD280,
檢測DNA含量及質量。
[注意]
5g樣品可保證獲得500μg
DNA,
足供RFLP、PCR等分析之用。
dna提取方法
dna提取主要是CTAB方法，其它的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式：酶法。
一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb。
二.甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
四.異丙醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)。
五.表面活性劑快速制備法：用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應。
七.堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。
提取DNA的方法總結與比較
dna提取是一項經常要做的實驗，下面我們就總結了四種dna提取方法并做詳細說明和比較。
一.濃鹽法提取dna：
A. 利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.
B. 也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些.
C.以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNa對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA.
二.陰離子去污劑法提取dna： 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA
三.苯酚抽提法提取dna：苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNa的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質，用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態
四.水抽提法提取dna:利用核酸溶解于水的性質,將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ，80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最后在空氣中干燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.
怎么提取dna
實驗開始前，要準備這幾樣東西，包括一根香蕉、異丙醇、食鹽、液體肥皂、玻璃杯，攪拌器，紗布，漏勺和碟子。
一切準備就緒后，先將1湯勺食鹽和10滴含有十二烷基硫酸鈉的液體肥皂混合在玻璃杯中，加入100毫升熱水，攪拌均勻，如下圖所示：
取出第二個杯子，放入去皮切成段的香蕉，加入100毫升冷水，再從第一杯中取5湯匙沉淀溶液，徹底混合在一起。
接下來，通過幾層紗布過濾混合液，小心地加入200毫升冰冷的異丙醇。
觀察杯中形成的白色纖維物質（下圖），即為香蕉的DNA。
同樣的DNA提取方法也適用于草莓、西紅柿或者桃子。
你肯定在想，這種DNA提取方法的原理是什么？
其實，這是因為液體肥皂含有表面活性劑，有助于破壞香蕉的細胞膜和細胞核，而鹽中的鈉離子與DNA分子的磷酸基團結合，有助于將DNA分離出來。添加冷異丙醇則可降低DNA和鈉化合物在水中的溶解度。
