藍白斑篩選(藍白斑篩選中,藍色菌落還是白色菌落最可能含有重組子)

藍白斑篩選的原理是什么？

一些載體（如PUC系列質粒）帶有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的編碼區，該編碼區中含有多克隆位點（MCS），可用于構建重組子。

這種載體適用于僅編碼β-半乳糖苷酶C端ω片段的突變宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有半乳糖苷酶活性，但它們同時存在時，α片段與ω片段可通過α-互補形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。這樣，lacZ基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補。

由α-互補而產生的LacZ+細菌在誘導劑IPTG（異丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在時產生藍色菌落。而當外源DNA插入到質粒的多克隆位點后，幾乎不可避免地破壞α片段的編碼，使得帶有重組質粒的LacZ-細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，稱為藍白斑篩選。

缺點

由于多種原因，一些白色菌落可能不包含所需的重組質粒。連接的 DNA 可能不是正確的或未正確連接的，并且某些線性化載體可能被轉化，其末端“修復”并連接在一起，從而不會產生 LacZα，也不會形成藍色菌落。

突變也會導致 α 片段不被表達。完全沒有載體的菌落也會出現白色，有時可能會在抗生素后顯示為衛星菌落已用完。

藍色菌落也可能包含插入物。當插入片段與 LacZα 基因“符合讀框”且插入片段中不存在終止密碼子時，就會發生這種情況。

以上內容參考百度百科-藍白斑篩選

藍白斑篩選的原理是什么?

利用乳糖操縱子系統。

野生型埃希氏大腸菌（E.Coli）產生的β-半乳糖苷酶可以將無色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深藍色的物質5-溴-4-靛藍。5-溴-4-靛藍可使整個菌落產生藍色變化。在經人工插入外源基因后，突變型大腸桿菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切斷，無法形成完整的β半乳糖苷酶，故不能對無色化合物X-gal進行切割，菌落呈白色。

一些載體（如PUC系列質粒）帶有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的編碼區，該編碼區中含有多克隆位點（MCS），可用于構建重組子。這種載體適用于僅編碼β-半乳糖苷酶C端ω片段的突變宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有半乳糖苷酶活性，但它們同時存在時，α片段與ω片段可通過α-互補形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。

這樣，lacZ基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補。由α-互補而產生的LacZ+細菌在誘導劑IPTG（異丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在時產生藍色菌落。而當外源DNA插入到質粒的多克隆位點后，幾乎不可避免地破壞α片段的編碼，使得帶有重組質粒的LacZ-細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，稱為藍白斑篩選。

藍白斑篩選的原理是什么？

藍白斑篩選是一種基因工程常用的細菌重組子的篩選方法。
野生型大腸桿菌（E.Coli）產生的β-半乳糖苷酶可以將無色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深藍色的物質5-溴-4-靛藍。5-溴-4-靛藍可使整個菌落產生藍色變化。在經人工插入外源基因后，突變型大腸桿菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切斷，無法形成完整的β半乳糖苷酶，故不能對無色化合物X-gal進行切割，菌落呈白色。藍白斑篩選是重組子篩選的一種方法，是根據載體的遺傳特征篩選重組子，主要為α-互補與抗生素基因。藍白斑篩選在指示培養基上，未轉化質粒的菌落因無抗生素抗性而不能生長，重組質粒的菌落是白色的，非重組質粒的菌落是藍色的，以顏色不同為依據直接篩選重組克隆的方法。
一些載體（如PUC系列質粒）帶有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的編碼區，該編碼區中含有多克隆位點（MCS），可用于構建重組子 。這種載體適用于僅編碼β-半乳糖苷酶C端ω片段的突變宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有半乳糖苷酶活性，但它們同時存在時，α片段與ω片段可通過α-互補形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。這樣，lacZ基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補。由α-互補而產生的LacZ+細菌在誘導劑IPTG（異丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在時產生藍色菌落。而當外源DNA插入到質粒的多克隆位點后，幾乎不可避免地破壞α片段的編碼，使得帶有重組質粒的LacZ-細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，稱為藍白斑篩選。

酵母雙雜交技術與藍白斑篩選的區別

酵母雙雜交系統是將待研究的兩種蛋白質分別克隆（融合)到酵母表達質粒的轉錄激活域(如GAL4等)的DNA結合結構域(DNA-BD)和轉錄激活域(AD)上，構建成融合表達載體，從表達產物分析兩種蛋白質相互作用的系統。藍白斑篩選是重組子篩選的一種方法，是根據載體的遺傳特征篩選重組子。
藍白斑篩選主要為基因互補與抗生素基因。藍白斑篩選在指示培養基上，未轉化質粒的菌落因無抗生素抗性而不能生長，重組質粒的菌落是白色的，非重組質粒的菌落是藍色的，以顏色不同為依據直接篩選重組克隆的方法。