研究進(jìn)展

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中藥研究進(jìn)展綜述

高乃群S080601018分析化學(xué)專業(yè)

中藥要走向世界，服務(wù)于全人類，就必須規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化、

工程化、現(xiàn)代化。中成藥多以復(fù)方為主，原料多是生藥，生藥又

因各地用藥習(xí)慣不同、產(chǎn)地和采收季節(jié)不同等因素影響，有效成

分含量波動(dòng)較大，導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定。因此對產(chǎn)品中有效成分

的定性、定量檢驗(yàn)和控制是穩(wěn)定藥效的重要方面。

如果將處方中各味中藥的作用找到對應(yīng)的有效成分，即可根

據(jù)該成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)提取工藝，用HPLC檢測各有效成分的

含量，最后用提取物組方。這樣，成分是已知的，數(shù)量是確定的，

質(zhì)量就得以穩(wěn)定。在這里，處方是一個(gè)群(Group)，處方中的任

意一味中藥是構(gòu)成該群的一個(gè)集合(Set)，該集合又由成分子集的

并(Union)組成。一個(gè)子集是一個(gè)點(diǎn)陣，經(jīng)過不同的提取分離工藝

處理，點(diǎn)陣轉(zhuǎn)化成三維立體矩陣。點(diǎn)陣中的一個(gè)元素(Element)

代表子集中的一個(gè)成分，一個(gè)成分有一種化學(xué)結(jié)構(gòu)，一種結(jié)構(gòu)就

具備一種藥理活性，藥理就是結(jié)構(gòu)到藥效的映射(Map-ping)，藥

效是結(jié)構(gòu)的象(Image)。隨著提取分離工藝的不同，點(diǎn)陣中各元素

轉(zhuǎn)變成三維立體矩陣后對應(yīng)的各元素的高度不同，也就是各成分

的含量不同。一種結(jié)構(gòu)成分的量決定著它的活性功能的強(qiáng)度，譬

如ED

50,本集合有單元素集，但沒有空集。本集合都是有限集。

當(dāng)本集合是單元素集時(shí)，處方中只有一種成分，即為作用單一的

西藥。成分在人體內(nèi)的作用是其結(jié)構(gòu)和數(shù)量的函數(shù)，而成分的數(shù)

2

量又是提取工藝的函數(shù)。

中藥復(fù)方的組合配伍是有機(jī)的、相互緊密聯(lián)系的，是一個(gè)整

體結(jié)構(gòu)，每味中藥間的相互作用是建立在成分結(jié)構(gòu)、數(shù)量基礎(chǔ)上

的。同一味中藥在不同處方中有不同的作用，作用的強(qiáng)度用劑量

來控制。所以對每一個(gè)處方都要認(rèn)真研究，搞清處方中每味中藥

的作用和引起此作用的有效成分，根據(jù)這些成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)才能

設(shè)計(jì)提取工藝，提取的目的是拿到能夠?qū)崿F(xiàn)該藥理功能的有效成

分，而非本中藥的主要成分。不同的提取工藝會(huì)得到不同的成分

矩陣，且矩陣中的元素相互間是有交叉作用的，所以工藝定向錯(cuò)

誤將導(dǎo)致新組成的復(fù)方功能偏離主治目標(biāo)，甚至毒副作用增加，

沒有醫(yī)療效果。

提取物組方不是機(jī)械的混合，一定要保證原處方結(jié)構(gòu)的整體

性、完整性和有機(jī)性。通過定向提取的成分集合，可以用HPLC

測得有效成分的含量，根據(jù)含量和工藝收得率及原處方的生藥用

量，計(jì)算出該提取物的配伍劑量。這種由提取物組成的復(fù)方，因

其成分和工藝確定，把原料的品種、藥用部位、產(chǎn)地、采收季節(jié)

等因素均以產(chǎn)品收得率的形式消化在生產(chǎn)成本中，即產(chǎn)地、季節(jié)

等差異只引起收得率的差異、成本的差異、價(jià)格的差異，而不引

起質(zhì)量的差異，從而使復(fù)方的成分得以量化，質(zhì)量得以穩(wěn)定。確

保了醫(yī)生開什么藥，患者用什么藥;醫(yī)生開多少，患者用多少;醫(yī)

生怎么開，患者怎么用。確保了醫(yī)和藥的統(tǒng)一，處方和藥品的統(tǒng)

一，藥性和療效的統(tǒng)一，醫(yī)生和患者的統(tǒng)一。

3

有什么結(jié)構(gòu)就有什么功能，用什么工藝就得到什么結(jié)構(gòu);結(jié)

果跟著方法走，藥理跟著成分走，成分跟著工藝走;藥效是成分

的函數(shù)，成分是工藝的函數(shù)。

下面介紹一些中藥的分離方法,以供借鑒:

銀杏葉中提取黃酮的最佳工藝條件研究

銀杏葉LeavesofGinkgobilobaL.提取物GBE主要含黃酮、內(nèi)酯

兩大部分活性成分。總黃酮以山奈酚Kaempferol、槲皮素、異鼠李

素Lsorhamntin的甙為主;萜內(nèi)酯則以銀杏內(nèi)酯GinkgolideA.B.C和

白果內(nèi)酯BilodalideA為主。GBE可擴(kuò)張冠脈血管,增加腦血流量,

拮抗PAF,可治療由于血管老化、腦血管供血不足所致的多種疾病。其

提取方法有些報(bào)道,但缺乏系統(tǒng)性的研究本研究對其生產(chǎn)工藝條件

做了較深入探索,在最佳條件下,GBE中黃酮含量穩(wěn)定在26%以上,

內(nèi)酯含量穩(wěn)定在6%以上。

1.實(shí)驗(yàn)

111設(shè)備、儀器和材料

3m3不銹鋼提取罐,JN—500型不銹鋼真空濃縮罐,015m3不銹鋼

沉降槽,TMS—3型板框壓濾機(jī),1m3不銹鋼吸附床,NZ—80型真

空濃縮罐.

Waters600—E型高壓液相色譜儀。

乙醇,食品一級;燒堿,工業(yè)一級;AB28型樹脂,南開大學(xué)化工廠產(chǎn);

4

銀杏葉.

三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇、甲苯、丙酮、三氯化鋁等,均為分析純.

11.2提取工藝流程和實(shí)驗(yàn)操作步驟

提取工藝流程見圖

銀杏樹葉陰干粉碎,置于提取罐中,用90%乙醇80℃回流提取3

次,每次115h,提取液合并后加入JN—500真空濃縮罐中在60℃

下減壓濃縮成浸膏。將此浸膏置于沉降槽中加水?dāng)嚢枞芙?靜置沉降

3h,然后由上而下抽取上板框壓濾機(jī)過濾,得到的濾餅重復(fù)水沉降操

作。水沉降加水量為前兩次是銀杏浸膏體積的3倍和2倍,第三次

以后均為1倍.

合并所有的水沉降過濾液,用鹽酸調(diào)整pH值,按樹脂重量

的兩倍計(jì)量取液,上樹脂床進(jìn)行吸附,待液流完后,分別用水和25%

乙醇洗滌床層,然后用70%乙醇進(jìn)行洗脫,洗脫終點(diǎn)為用薄層色譜

法檢查無黃酮。用NZ—80真空濃縮罐將洗脫液在60℃下減壓濃

5

縮回收乙醇后,進(jìn)行干燥成粉。

最后一次過濾得的濾餅用少量甲醇拌成稠浸膏,加醋酸乙酯進(jìn)行

溶解沉降3次,每次都需過濾除雜,濾得的醋酸乙酯溶液經(jīng)適度濃

縮后,進(jìn)行柱層析,采用薄層色譜法檢查出含銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯的

流液段,再濃縮結(jié)晶出總內(nèi)酯,將此結(jié)晶與前面干燥得的粉末混勻,

即得到GBE成品。

113分析方法

提取過程控制分析采用薄層色譜法,條件如下:

黃酮:硅膠G+0.5%CMC,110℃活化90min,CHCl/MeOH/EOE

2∶1∶1展開,噴5%三氯化鋁的乙醇液,熱風(fēng)吹干后365nm熒光

燈下檢查。

內(nèi)酯:硅膠G+0.5CMC,110℃活化90min,To1./MeCO7∶3展開,

吹干后,先噴水看準(zhǔn)白色斑點(diǎn)位置,再用強(qiáng)熱風(fēng)吹干30s,于熒光燈的

365nm和254nm波長下觀察內(nèi)酯斑點(diǎn).

3結(jié)論

銀杏黃酮提取過程的最佳工藝條件為:對90%乙醇回流提取得

到的浸膏,采用5次水沉降除雜;在pH3～4條件下進(jìn)行吸附操作;用

樹脂重量的13倍水和7倍25%乙醇先后洗滌已吸附黃酮的樹脂床;

樹脂每吸附過3次再生一次;洗脫液濃縮后采用噴霧干燥法干燥,條

件為進(jìn)口180℃,出口80℃。在此最佳工藝條件下產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,

符合德國標(biāo)準(zhǔn),收率在112%～116%之間以銀杏)葉干重計(jì)。

紫杉醇的研究進(jìn)展

6

紫杉醇（taxol，商品名Paclitaxel）是wall及其合作者首次從短

葉紅豆杉Taxusbrevifolia樹皮中分離得到的一種重要的次級代謝產(chǎn)

物.自1956年發(fā)現(xiàn)至今已有近50年的歷史。美國FDA于1992年批

準(zhǔn)紫杉醇注射液上市,它對卵巢癌、乳腺癌等均有顯著療效，對黑色

素瘤、結(jié)腸癌和人免疫缺陷病毒（HIV）引起的卡波濟(jì)肉瘤亦有較好

的療效。紫杉

醇目前主要從紅豆杉的樹皮中提取，難以滿足市場需要。由于

紫杉醇在植物體內(nèi)的含量相當(dāng)?shù)停壳肮J(rèn)含量最高的短葉紅豆杉樹

皮中也僅含0.069%)，加上資源很匱乏，而且紅豆杉屬植物生長緩慢，

對紫杉醇的進(jìn)一步開發(fā)利用造成了很大的困難。因此，找到合適的紫

杉醇生產(chǎn)來源非常重要。下面介紹一些分離方法,進(jìn)行比較;

一.傳統(tǒng)的工業(yè)分離方法

1.儀器設(shè)備和材料

1m3不銹鋼滲漉罐,1m3不銹鋼回流提取罐、3m3不銹鋼萃取罐(自

制),NZ80不銹鋼真空濃縮罐(常熟中藥制藥機(jī)械總廠),T-M-S-3型板

框過濾機(jī)(浙江海寧過濾器材廠),Φ200×2000mm不銹鋼色譜柱

(自制),Φ50×1500mm、Φ30×1200mm玻璃色譜柱(自制)。

紅豆杉莖皮,采于四川貢嘎山.其紫杉醇含量約67ppm。

2.方法和結(jié)果

2.1提取

提取中國紅豆杉莖皮經(jīng)粉碎,自然陰干,得干燥度為80%的棕黃色

絲狀粉末.取原料粗粉100kg于回流提取罐中,加95%乙醇回流提取3

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次,每次1.5h。提取液于60°C減壓濃縮成浸膏,加水沉降3次,板框

壓濾機(jī)濾取清液,以二氯甲烷萃取6次。萃取液加無水硫酸鈉干燥脫

水,于40°C濃縮成膏,真空抽干。還可以用1%醋酸滲漉提取:方法如

下:

取原料粗粉100kg于滲漉筒中,加1%醋酸水溶液浸泡24h后開

始滲漉,流速500ml/min。收取滲漉液8倍量(按原料重量計(jì)),以二氯甲

烷萃取6次。萃取液加無水硫酸鈉干燥脫水,于40°C濃縮成膏,真空

抽干。

2.2分離

取檸檬酸滲漉提取的總萜以氯仿溶解,拌入等重量的80~100目硅

膠,于室溫干燥后進(jìn)行柱色譜分離。將100~160目硅膠20kg裝入Φ

200×2000mm不銹鋼色譜柱敲實(shí),以氯仿-甲醇(99∶1)濕潤,按硅膠:

總萜=8∶1加入拌過硅膠的總萜樣品5kg(含總萜2.5kg),然后用氯仿-

甲醇(99∶1)洗脫,每流份2000ml,流速為每流份40min。每流份抽樣

200ml濃縮后以TLC檢查成分分布情況。TLC條件:硅膠H以1%CMC

鋪板,于105°C活化90min,板厚0.1mm;以氯仿-甲醇(97∶3)展開;噴

5%硫酸吹熱風(fēng)顯色。合并含1流份,減壓濃縮抽干,得含1部位430g。

合并6根色譜柱的這一部位共約2500g,以氯仿溶解拌入等重量

80~100目硅膠,于室溫干燥,再進(jìn)行柱色譜分離。取100~160目硅膠20

kg裝入Φ200×2000mm不銹鋼色譜柱敲實(shí),先以氯仿-醋酸乙酯

(4∶1)濕潤,然后將上述樣品上樣。以氯仿-醋酸乙酯(4∶1)洗脫,每流

份2000ml,流速為每流份40min。每流份抽樣200ml濃縮后以TLC

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檢查成分分布情況。TLC制板條件同上;氯仿-甲醇(96∶4)展開;噴5%

硫酸吹熱風(fēng)顯色。合并各相應(yīng)流份,減壓濃縮抽干得到:t前交叉部位

124.3g(TLCRf值大于t的雜質(zhì)和t的混合物),t后交叉部位82.7g

(TLCRf值小于t的雜質(zhì)和t的混合物),c、t交叉部位570.2g(含

c48%,t52%)。

2.3紫杉醇(t)和三尖杉寧堿(c)的分離

c和t的常規(guī)分離一般采用分配柱色譜分離,時(shí)間長,消耗大,分離

效率很低,是1提取工作中的一道難關(guān)。其后采用制備高效液相色譜

方法分離,雖然分離效率有所提高,但仍難以形成規(guī)模化生產(chǎn)。

c的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)中,由于C′5----N′4酰胺的影響,C′7----C′6的

雙鍵π電子云向C′6乃至C′5方向偏移而有利于溴的進(jìn)攻;而t的

側(cè)鏈的這一位置系一苯環(huán),相對于c其電子云密度比較均勻而穩(wěn)定。

在溫和條件下,c易于發(fā)生溴加成,而t卻無此條件。利用c、t結(jié)構(gòu)中

的這一差異,采用溴加成方法改變c的側(cè)鏈結(jié)構(gòu),從而改變其分子的極

性,可大大降低柱色譜分離c、t的難度,采用普通的硅膠吸附柱色譜即

可取得滿意的分離效果。

為了使副產(chǎn)物減到最小限度,加成反應(yīng)的原料應(yīng)只含有c、t兩成

分,所用溶劑也以極性越小越好。紅豆杉總萜經(jīng)過前述兩次硅膠柱色

譜分離,可以得到TLC只呈一個(gè)斑點(diǎn)的c、t交叉部位,能夠滿足溴加成

反應(yīng)對原料的純度要求。其具體操作如下:

A——取上述c、t交叉部位17g,加入四氯化碳80ml使溶解,加

水1滴。

9

B——取溴0.5ml加入四氯化碳10ml使溶解。將B緩緩加入A

中,邊加邊攪拌,于室溫反應(yīng)5min,然后進(jìn)行柱色譜分離。取100~160

目硅膠340g裝柱,以四氯化碳濕潤,將溴加成反應(yīng)液加入柱頂,以四氯

化碳沖洗至沖洗液基本無色,然后用氯仿-甲醇(100:1)洗脫,收集含t流

份,回收溶劑得1粗品7.2g。用乙醇溶解,加入5倍量蒸餾水,析出紫杉

醇,抽濾,水洗,減壓烘干得精品5.03g。HPLC測定含量為99.19%。

HPLC條件:

ZorbaxODS柱(4×250mm),流動(dòng)相乙腈-水(45∶55),流速1.5

ml/min,檢測波長227nm,測定結(jié)果見圖

柱色譜分離的非紫杉醇部分溶于乙醇,用5%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)

pH至9.5~10,于室溫水解1h后,以硅膠柱色譜分離,以氯仿-乙醚(8∶

2)洗脫,得到baccatin-Ⅲ。

紅豆杉莖皮粗粉4160kg(含紫杉醇67ppm),采用上述1%檸檬酸滲

漉,柱色譜分離及溴加成后柱色譜分離工藝,共得到紫杉醇精品187.6g,

收率為45ppm,紫杉醇的回收率可以達(dá)到70%左右。

參考文獻(xiàn)

1GuenardD,Gueritte-egeleinF,mRes,

10

1993;26(4)∶160

2WitherupKM,LookSA,od.

3章菽等.藥學(xué)學(xué)報(bào),1992;27(4)∶268

4紫杉醇生產(chǎn)新工藝研究陳沖羅思齊

二.超臨界二氧化碳流體萃取紅豆杉枝葉中

紫杉醇的研究

1材料

CO

2

-SFE裝置(南通市成宇石油科技開發(fā)有限公司)萃取器容

積為1000ml操作壓力可達(dá)50MPa,第一和第二分離器均為500

ml操作壓力可達(dá)10MPa,萃取器和第一分離器均有保溫裝置,操

作溫度可達(dá)90℃。HPLC:為日本島津LC-6A型高效液相色譜儀;

紅豆杉枝葉:由信豐金盆山林場紅豆杉種植基地提供;紫杉醇對照

品:由華西藥學(xué)院研究所提供;CO

2

氣體:食品級,純度為99.5%;其

余試劑為分析純。

2方法

提取液均用HPLC測定紫杉醇含量。

2.1CO2-SFE法萃取紫杉醇取300.1687g粒徑為0.25~0.

45mm的枝葉樣品在27.6MPa,31℃進(jìn)行超臨界CO2流體萃取,

因?yàn)槌R界CO2流體對極性強(qiáng)的物質(zhì)溶解能力較差,加入少量的

甲醇作為夾帶劑,可大大增加其溶解能力。將樣品放入萃取池

中,CO

2

和甲醇分別由CO

2

泵和夾帶劑泵打入各泵的腔體中,經(jīng)流

體混合后,流入萃取器中的集流腔,達(dá)到27.6MPa,31℃后進(jìn)入萃取

11

池開始萃取,動(dòng)態(tài)萃取時(shí),超臨界流體經(jīng)限流器流入收集瓶后減壓

排放,流體帶出的物質(zhì)溶于收集液中予以收集,用甲醇作吸收液,

在30,60,90,120min各收集1次,收集液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,并于50℃

真空干燥2h后檢測其中的紫杉醇含量。

2.2紫杉醇含量測定

2.2.1色譜條件色譜柱:貝克曼ODS(10μm,4.6mm×

250mm);流動(dòng)相:乙腈-甲醇(30∶70);檢測波長:227nm;流速:1.

0ml/min。

2.2.2線性關(guān)系精密稱取紫杉醇約25mg,加醇至250m,l

分別量取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0m;l分別加入流動(dòng)相,定量至

25m,l取10μl進(jìn)樣,以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),得回歸方

程為Y=-973.6+287.1X,r=0.999,表明紫杉醇在10~25μg/m,l濃

度內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3回收率實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取紫杉醇對照品10mg,于100ml

容量瓶中加入溶劑,定量過濾,濾液搖勻,得到對照儲(chǔ)備溶液。精密

量取3ml置于25ml容量瓶中,加入流動(dòng)相稀釋至刻度定容,進(jìn)樣

10μl。計(jì)算平均回收收率為99.98%,RSD=0.97%(n=6)。

2.2.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將上步溶液陳化6h,重復(fù)進(jìn)行,峰面積基

本不變,避光放置24h,峰面積基本不變。

2.2.5含量測定分別精密稱取紫杉醇對照品自制試樣,10

mg加入流動(dòng)相溶解并制成2μg/m,l按上述方法測得譜圖,由歸一

化方程計(jì)算出含量為64.48%。

12

2.2.6雜質(zhì)的處理實(shí)驗(yàn)對比參照樣制備:準(zhǔn)確稱取紫杉醇

對照品10mg。已知雜質(zhì)對照品10mg,置于50ml容量瓶中,加流

動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,精密量取5ml置100ml容量瓶中,加流動(dòng)

相并稀釋至刻度。自制樣品制備:準(zhǔn)確稱取自制樣5mg置于250ml

容量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度。取對照樣品和自制樣品各10μl

進(jìn)樣,記錄色譜圖對自制樣品出現(xiàn)的已知雜質(zhì),按外標(biāo)法計(jì)算含量,

對于自制樣品出現(xiàn)的未知雜質(zhì),則與對照品溶液中紫杉醇峰比較

計(jì)算,最后計(jì)算出雜質(zhì)含量。

3結(jié)果

利用超臨界CO2流體萃取法從紅豆杉枝葉中提取分離紫杉

醇,用高效液相色譜法測定萃取物中紫杉醇含量,其結(jié)果表明,粒

徑為0.25~0.45mm的紅豆杉枝葉在27.6MPa,31℃下以甲醇為

夾帶劑和吸收液進(jìn)行萃取,在2h內(nèi)可使紫杉醇萃取完全,萃取率

達(dá)96.5%,萃取物中紫杉醇純度可達(dá)1%,以貝克曼ODS4.6mm×

250mm為色譜柱,乙腈—甲醇為流動(dòng)物,流速1.0ml/min,紫杉醇

在10~25μg/ml范圍內(nèi)線形良好,平均回收率為99.98%,RSD=0.

97%。平均回收率為99.98%,RSD=0.97%。

紫杉醇粒徑為0.25~0.45mm時(shí),流動(dòng)相選擇乙腈-甲醇

(30∶70)分離效果最好,峰形對稱;波長在225nm~229nm處均可

得到有效波形,本實(shí)驗(yàn)選擇實(shí)際測量結(jié)果的平均值,即227nm,此波

長下檢測效果最為明顯。由于紫杉醇本身具有鄰位兩個(gè)環(huán)內(nèi)雙鍵,

具有一定的化學(xué)活性,因此檢測樣不能長期保存,避免與氧化劑接

13

觸。

參考資料

史清文,趙丁,劉素云,等.天然藥物紫杉醇的研究概

況與開發(fā)綜述[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1997,9(3):102.

三.內(nèi)共生真菌生產(chǎn)紫杉醇

1.生產(chǎn)簡介

共生關(guān)系是指一個(gè)以上的有機(jī)體，雙方建立互利共存、或一

方有利而對另一方無害地生活在一起的一種關(guān)系.

共生是生物適應(yīng)自然環(huán)境的一種必然現(xiàn)象，不同種類的生物

常以種群方式聚集在一起生活，不同種類的生物之間以及微生

物與其它生物之間也存在十分復(fù)雜的相互關(guān)系，通過它們的相

互作用促進(jìn)了整個(gè)生物界的進(jìn)化和發(fā)展。

內(nèi)共生真菌(又稱內(nèi)生真菌，endophyticfungus，endofungus，

endophyte)是存在于健康植物的組織和器官內(nèi)部中，形成不明顯

浸染的各種真菌，是植物微生態(tài)系統(tǒng)的天然組成部分。1993年

美國學(xué)者Stierle等首次從短葉紫杉(Taxusbrevifolia)的韌皮部中

分離出一種新的內(nèi)共生真菌Taxomycesandreanae，可在半合成

培養(yǎng)液中產(chǎn)生紫杉醇和紫杉烷類化合物，表明有的內(nèi)共生真菌

具有合成和宿主植物相同或相似的活性成分的能力。這一發(fā)現(xiàn)

為用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)紫杉醇以解決紫杉醇藥源危機(jī)提供了一

條新途徑,并成為從藥用植物中分離內(nèi)共生真菌熱潮的開端，為

人類解決某些藥用植物生長緩慢、資源緊缺等因素帶來的藥源

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緊張和生態(tài)破壞問題，利用植物內(nèi)共生真菌進(jìn)行工業(yè)化發(fā)酵生

產(chǎn)某些重要天然藥物提供了新的思路。

2.檢測

HPLC在分離紫杉烷類化合物方面更具優(yōu)勢，尤其

是定量分析，因而得到廣泛研究。紫杉醇的HPLC分析

始于80年代末，隨后得到了廣泛應(yīng)用。正相、反相色

譜均有應(yīng)用，分離用到的固定相也有10多種。由于紫

杉醇和與其伴生的紫杉烷類化合物在化學(xué)結(jié)構(gòu)和極性

方面極為相似，因而分離純化具有很高的難度。廣泛應(yīng)

用的普通填料主要有ODS(C18)、氰基柱和苯基柱。用

這些填料的HPLC柱，雖然可以實(shí)現(xiàn)紫杉醇和三尖杉寧

堿的分離，但卻不能有效地分析出另一個(gè)非常難以分離

的7-表-10-去乙酰紫杉醇(7-epi-10-deacetyl-taxol)。為

解決這一難題，已開發(fā)出包括diphenyl、

pentafluorophenyl(PFP)在內(nèi)的10多種新型填料。這些專

門用于紫杉烷類化合物分離分析的HPLC柱，在測定紫

杉醇含量時(shí)，排除了雜質(zhì)干擾，使測定結(jié)果更準(zhǔn)確可信，

具有很好的分離效果。此外，具有極高柱效的微型柱

(microcolumn)也有應(yīng)用.

在HPLC分析方法方面，除了開發(fā)新型填料外，通

過改變流動(dòng)相的組成，或選擇適當(dāng)?shù)南疵摲绞剑材苡?/p>

效地解決上述問題。在分離過程中，采用的流動(dòng)相通常

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為乙腈-水或甲醇-水二元溶劑系統(tǒng)。在流動(dòng)相中加入磷

酸鹽緩沖溶液，或醋酸銨緩沖溶液，或采用乙腈-甲醇-

水三元溶劑系統(tǒng)，均可以改善分離。此外，梯度洗脫方

式也得到廣泛采用，收到良好效果。HPLC法分析紫杉

醇，絕大多數(shù)使用的是紫外檢測器，檢測波長多為

225nm～230nm，檢測限為μg/mL級。

HPLC/MS質(zhì)譜能從復(fù)雜的混合物中準(zhǔn)確找到與要

求相符合的一定分子量(m/z)的物質(zhì)，而不需要較高的純

度，是檢測混合物中特定成份的有效方法，結(jié)合HPLC

的高效分離，更能對混合物中的微量成份作出定性、定

量分析。Auriola和Bitsch等分別成功地實(shí)現(xiàn)了

HPLC/MS聯(lián)用技術(shù)，來分析檢測紫杉烷類化合物，檢

測限可提高到ng/mL級。

毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳(CapillaryElectrophoresis,CE)作為迄今

分辨率最高的分離技術(shù)，應(yīng)用日趨廣泛。Chan等首次

將高效毛細(xì)管電泳(HPCE)引入紫杉醇的分析，采用的是

膠束電動(dòng)色譜(MEKC)分離模式。Hempel等則成功地將

MEKC用于生物體液中紫杉醇的定量分析，檢測中使用

紫外檢測器(228nm)，檢測限可達(dá)20ng/mL，線性范圍

為50ng/mL～5000ng/mL，顯示了良好的應(yīng)用前景。

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致謝:

感謝醫(yī)藥學(xué)院<<藥學(xué)研究進(jìn)展>>的任課老

師們,通過本門課的學(xué)習(xí),我對醫(yī)藥有了更深刻

的認(rèn)識(shí)和全面的了解,將使我在以后的醫(yī)藥研

究中獲益.