藥品中微生物污染檢測方法驗證的必要性研究

2023年12月12日發(作者：新春到)

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藥品中微生物污染檢測方法驗證的必要性研究

摘要：對微生物的檢測的過程比較耗時、復雜以及繁瑣，并且在其中還存在著很多不確定的干擾因素，因此需要對藥品中微生物污染檢測方法進行驗證。

關鍵詞：藥品；微生物污染檢測；驗證；必要性

微生物尤其是混在藥品之中的微生物，其生長會受到各種因素影響，藥品自身可能會有防腐劑以及抑菌成分，這些成分會對微生物起到抑制甚至是消滅的作用，而受到抑制作用的微生物也會受到一定損傷[1]。因此在藥品中微生物污染檢測中，培養基的條件、測定的方法、測定樣品濃度、樣品處理的方法以及微生物抗性都會對檢測結果造成一定影響，所以要對藥品中微生物污染檢測方法進行驗證[2]。本文就此介紹了藥品微生物污染檢測的原則、難點、過程以及存在問題，具體如下。

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2. 藥品微生物污染檢測的原則

選擇藥品微生物污染檢測的方法往往需要遵循兩個原則，即操作需要簡單快速，方法需要適宜。第一操作需要簡單快速，制備實驗溶液、消除抑菌的成分以及檢驗微生物都需要快速而又簡單，因為檢驗方法太慢或者操作比較復雜繁瑣，會導致實驗產品中的被污染微生物被破壞，并且會產生人為的污染。第二方法需要適宜，對于藥品微生物污染檢測需要選擇比較合適的方法，尤其是抑菌劑或者中和劑的消除方法在選擇時應該盡量減少人為的破壞，避免試驗產品中被污染的微生物遭受到破壞，并且使用膜過濾法篩選那些有強抑菌作用的產品。

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3. 藥品微生物污染檢測的難點

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2. 微生物的狀態非常不穩定。微生物的生命活動如生長繁殖需要處在適宜的條件與環境中，如果環境不適合微生物生存則對微生物的生命活動造成影響，微生物可能會進入休眠的狀態，這也是在不同時間以及不同環境中對微生物的檢測會出現不同檢測結果的原因。特別是那些混在抑菌藥品里的微生物，只是受到了抑菌藥物的抑制作用卻沒有被徹底地消滅，當這些沒有被徹底殺死的微生物隨著人服用藥物進入到人體中時，等到條件與環境合適時又會重新生長于繁殖起來，從而對人體會造成危害。

3. 微生物具有不確定性。微生物污染藥品是一件不確定的事件，而造成這種污染的因素也有多種，如包裝環節受到污染，運輸過程受到污染，設備污染，制藥的環境受到污染等，而這些藥品污染的來源與路徑也無法預測，并且對于基數龐大的藥品的檢查一般采取的是抽樣式的檢查，微生物污染又是一個隨機的變量，從而導致了檢測的難度大大增加。

4. 微生物具有不均勻性。微生物是有簇團性的，由微生物形成的簇團緊密度以及大小有可遺傳性的特點，并且差異比較大，對檢查的有效性會造成一定影響。

5. 對微生物的檢查比較復雜。對藥品中微生物污染檢測方法驗證的時間周期比較長，檢測的程序也比較繁瑣，并且存在許多干擾因素，使檢測的難度大大提升。

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4. 藥品微生物污染檢測的過程

準備菌株，對培養基進行無菌檢查。在使用培養基時，檢查有無微生物受到污染或者出現干燥收縮，控制菌設定相應的對照組，檢測專屬性，培養基經預培養后根據測定的微生物選擇標準的菌株實驗，菌株不能超過五代。

驗證酵母菌、霉菌與細菌的計數方法與判斷指標。平行實驗需要進行三次及以上，對每次實驗的菌株回收率進行計算。驗證的菌株為枯草桿菌、黑曲霉菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌以及白色念珠菌。分為菌液組、實驗組、供試品的對照組以及稀釋劑的對照組，具體方法為每一株實驗菌準備兩個平皿，使用平皿法或者薄膜過濾法進行計數。根據實驗的結果計算稀釋劑的對照組菌株的回收率以及供試品組菌株的回收率，若是在任何一次的實驗中，實驗組菌株的回收率在50%以下，則應該使用薄膜過濾法、培養基稀釋法等對供試品中抑菌活性進行消除，然后重新進行驗證。

制備特殊的供試品。供試品由于其自身特性會產生出假陰性，因此可以利用微生物和供試品之間的差異在生產的過程中將供試品對于藥品微生物的影響消除，就可以準確地測出藥品微生物真正的含量。具體做法為：（1）使用中和法，使用的中和劑對微生物應該無毒，并且和抑菌成分相結合之后產生的物質對微生物也應該無毒，或者對微生物有毒但是卻不影響待檢查的菌株的檢出。（2）使用薄膜過濾法，這種方法是一種比較常被用于檢測的方法，一般用于過濾產品，如無菌的檢查，為了減少抑菌的效果，選擇濾膜時應選擇吸附性低的。如果經過簡單的過濾后沒有將抗菌物質完全清除，則應該使用其他的措施配合清除，如果藥品中存在防腐劑，則可以洗滌濾膜或者稀釋來使抑菌作用降低。（3）使用培養基稀釋法，首先在培養基內加入一定量的供試液、供試品，使單位體積的供試液或者供試品的濃度稀釋到沒有明顯的抑菌作用。注意這種方法的適用范圍為：樣品的抑菌活性比較弱，并且不能用薄膜過濾的方法，該方法驗證的重點在于：對增加到培養基的量以及供試液或供試品沒有顯示抑菌活性之間的關系把握好[3]。

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5. 藥品微生物檢測存在的問題

首先是負責藥品微生物檢測的工作人員水平過低，檢測工作人員大多都不是微生物專業的，在沒有經過相關的專業培訓情況下，對于相關的操作步驟、檢測方法以及對結果的觀察和分析都不能很好地掌握，因此會提高在檢驗過程中出現的風險。然后是負責藥品微生物檢測的工作人員的檢測意識比較低，有很大一部分的檢驗人員不能完全理解微生物檢驗的方法及其適用性的實驗，沒有重視藥品檢驗方法的適用性實驗。最后是對檢驗人員的培訓不夠，科技在不斷地發展，檢驗技術也在不斷地提高，檢驗人員若是自身水平一直原地踏步而跟不上時代的發展，那么會對檢驗結果造成很大誤差。

參考文獻

[1]張麗梅,張競帆,馬勇,王曉峰.LOGISTIC回歸在藥品微生物檢出數據分析中的應用[J].首都食品與醫藥,2020,27(11):128-130.

[2]周文君,劉愛明.不同藥品的微生物限度檢驗方法驗證的對比分析[J].家庭醫藥.就醫選藥,2017(09):46.

[3]李燕.加強藥品微生物實驗室檢測能力的措施探討[J].科學中國人,2017(09):68.

徐婉婷，女，1982年10月，山東聊城，本科，藥品檢驗，聊城市食品藥品檢驗檢測中心，主管藥師。

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