內參抗體和標簽抗體有哪些
內參抗體(Internal Control Antibody)是對內參蛋白進行檢測,以校正蛋白定量過程中的實驗誤差以及驗證轉膜、顯色等步驟是否正常!常用的內參包含 GAPDH、β-actin和 β-tubulin;及線粒體內參 COX IV和核內參 Histone H3和 PCNA等
內參抗體:
Beta-Actin mAb (1C7) 細胞總蛋白 42 kD Abbkine A01010 小鼠源單克隆
Beta-Actin mAb (1C7) , HRP 細胞總蛋白 42 kD Abbkine A01015 小鼠源單克隆,HRP偶聯
GAPDH mAb (2B5) 細胞總蛋白 36 kD Abbkine A01020 小鼠源單克隆
GAPDH mAb (2B5) , HRP 細胞總蛋白 36 kD Abbkine A01025 小鼠源單克隆,HRP偶聯
Beta-Tubuline mAb (3G6) 細胞總蛋白 55 kD Abbkine A01030 小鼠源單克隆
Plant Actin mAb (3T3) 植物細胞總蛋白 42 kD Abbkine A01050 小鼠源單克隆
PCNA mAb (1D7) 細胞核蛋白 28 kD Abbkine A01040 小鼠源單克隆
COX IV mAb (14Y2) 細胞線粒體總蛋白 16 kD Abbkine A01060 小鼠源單克隆
Histone H3 mAb (2D10) 細胞核蛋白 18 kD Abbkine A01070 小鼠源單克隆
標簽抗體(Tag Antibody)可用于檢測各種商品化表達載體上的標簽序列(如: Myc、Flag、His、GST、HA等),籍以分析目的蛋白的表達含量及其功能;
標簽抗體:
Anti-Biotin Antibodies
Anti-Dye Antibodies
Anti-FITC Antibodies
Anti-Fluorescent Protein Antibodies
Anti-HRP Antibodies
Beta Galatosida Antibodies
FLAG Tag Antibodies
GST Tag Antibodies
HA Tag Antibodies
His Tag Antibodies
Myc Tag Antibodies
TAP Tag Antibodies
V5 Tag Antibodies
WB試驗之如何選擇內參抗體
你選擇的目的蛋白位于什么地方~細胞核 胞質 線粒體~你要觀察的是目的蛋白在哪一部分的含量~選擇相應的內參~全細胞比如GAPDH HSP90AA1等~還有內參分子量要與目的蛋白分子量有一定差距~避免分不開~當然你可以選擇不同種屬的抗體來避免這個問題~
Western Blot為什么必須要用內參
內參是最容易被忽略的一項。我們知道,要用Western
Blot比較不同條件下或者不同組織中,目的蛋白表達量的相對多少,前提條件是等量的細胞上樣,才有比較的基礎。特別表達量不高時,上樣量的差別就很可能影響結果的分析。所以你需要內參。
內參即是內部參照(Internal
Control),對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白(Houkeeping
Proteins),它們在各組織和細胞中的表達相對恒定,在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。在Western
Blotting
實驗中,除了需要進行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上樣電泳、轉膜、靶蛋白抗體孵育、顯色等步驟以外,還需要進行內參的檢測,以校正蛋白質定量、上樣過程中存在的實驗誤差,保證實驗結果的準確性。
在Western
Blotting中使用內參其實就是在WB過程中的另外用內參對應的抗體檢測內參,這樣在檢測目的產物的同時可以檢測內參的表達,由于內參在各組織和細胞
中的表達相對恒定,借助檢測每個樣品內參的量就可以用于校正上樣誤差,這樣半定量的結果才更為可信。此外使用內參可以作為空白對照,檢測蛋白轉膜情況是否
完全、整個Western
Blot顯色或者發光體系是否正常。
在Western
Blotting實驗過程中使用內參的方法有:
一、
超級簡便的標記內參使用法:只要在二抗孵育時加入HRP標記內參抗體,按照正常操作即可。
二、普通內參:當目的蛋白的分子量大小與選用的內參蛋白分子量相差不大時,可以先進行目的蛋白的抗體溫育顯色和檢測。然后使用Strip緩沖液洗掉膜上的抗體,重新進行內參蛋白的抗體溫育、顯色檢測。
三、當目的蛋白的分子量大小與選用的內參蛋白分子量大小相差比較明顯情況下,可以在轉膜后預染,根據蛋白質Marker的大小將膜剪為大分子量和小分子量兩部分,使內參蛋白與目的蛋白分開。然后兩塊膜分別與內參蛋白抗體以及目的蛋白抗體進行溫育,二抗溫育以及顯色。
在抗體實驗中內參如何使用?
在蛋白檢測實驗中,最好是使用內參。這樣可以比較明確的說明你的上樣量,以及被檢測蛋白的量。內參一般選取樣品中的共有蛋白,其多為一些高豐度蛋白,對于特殊樣品,則選擇特有的一些蛋白。內參的使用和你測目的蛋白的方法相同,即兩者是在同一個體系中完成。