微生物實驗室真菌檢查質量控制流程

微生物實驗室真菌檢查質量控制流程

一、 目的

規范微生物實驗室管理程序，確保臨床報告的質量。

二、 適用范圍

微生物實驗室的各類真菌檢測。

三、 職責

實驗室檢驗人員均必須熟知并遵守本程序。

四、 程序

(一) 臨床樣本的采集與處理

1. 皮屑 邊緣、皰壁、膿液、深層趾（指）間皮屑

或活動邊緣皮屑，取材前75%酒精消毒，作KOH涂

片。

2. 甲屑 用細挫或牙科磨鉆取病甲與正常甲交界處

并且貼近甲床部的甲屑，作KOH涂片。

3. 毛發 取病發（變色，無光澤，彎曲，脆易折斷，

松動易拔除）15根，75%酒精消毒，3～5根作直接

鏡檢。

4. 膿液 無菌采集，注意顆粒，用無菌蒸餾水稀釋

后尋找。可作革蘭染色，常規的KOH涂片。

5. CSF 采集于無菌試管3～5ml，立即送檢。置冰

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箱不宜超過1h。離心后以無菌吸管吸取離心沉淀物

1ml，作墨汁涂片鏡檢。

6. 血液 無菌抽血3～5ml立即于無菌抗凝管中，

BHIB:血標本量為培養基量的1/10，37℃5～7d出現

渾濁或菌團，挑取鏡檢同時移種SDA（注：每天檢查

完畢后需搖動培養基，37℃震蕩培養可加速真菌的生

長，提高檢出率。不作直接檢查，因其直接檢查陽性

率低。

7. 體液、痰液、尿液、糞便 ①體液標本量10ml

離心沉淀取2ml沉淀液做直接鏡檢培養。②晨痰3～

5ml集于無菌瓶中(無菌生理鹽水漱口數次后)，挑取

黏液或膿性部分：KOH涂片培養。③早晨中段尿或清

潔尿10ml，離心取沉淀液1ml做KOH涂片培養

（SDA每管種0.5ml）。④拭子：一般盡量不用，缺

點：A.不能得到足量的標本；B.采集的標本也不易從

棉花纖維上分離下來;C.容易干竭。采集標本后應迅速

放入內裝1~2ml無菌蒸餾水的試管送檢KOH涂片培

養。⑤紙盒送檢，挑取黏液、膿血、乳酪樣部分KOH

涂片培養（加抗生素）注：單純培養陽性，不一定有

臨床意義，KOH涂片發現菌絲，有診斷意義。

8. 組織：標本置無菌平皿中立即送檢，置無菌勻漿器

加2ml蒸餾水，研磨成漿或1～2mm的小塊，KOH

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涂片培養。

(二) 涂片染色和直接鏡檢的質控

1. 氫氧化鉀/復方氫氧化鉀法：標本置于載玻片上，加

一滴浮載液，蓋上蓋玻片，放置片刻或微加熱，即在

火焰上快速通過2～3次，不應使其沸騰，以免結晶，

然后輕壓蓋玻片，驅逐氣泡并將標本壓薄，用棉拭或

吸水紙吸去周圍溢液，置于顯微鏡下檢查。檢查時應

遮去強光，先在低倍鏡下檢查有無菌絲和孢子，然后

用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態、特征、位置、大小

和排列等。

2. 膠紙粘貼法：用1cm×1.5cm的透明雙面膠帶貼于

取材部位數分鐘后自取材部位揭下，撕去復帶在上面

的底板紙貼在載玻片上，使原貼在取材部位的一面暴

露在上面，再進行革蘭染色或過碘酸錫夫染色，在操

作過程中應注意雙向膠帶粘貼在載玻片上時不可貼

反，而且要充分展平，否則影響觀察。

革蘭染色檢查法：在載玻片上滴1滴生理鹽水，將所采集的

標本均勻涂在載玻片上，自然干燥后，火焰固定或甲醇固定。

再選擇革蘭染色方法，染色后，以油鏡觀察。

3. 染液的質量控制

（1） 革蘭染液每次新配置和使用中每周一次進行

質控，并進行記錄。

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（2） 氫氧化鉀/復方氫氧化鉀每周進行一次質控。

(三) 真菌鑒定質量保證

1. 對酵母樣真菌如念珠菌或隱球菌在常規臨床細菌室

已有較成熟的方法學，可用顯色培養基。

2. 常規鑒定絲狀真菌主要依賴于其生長過程中形態變

化和特點，所以要求從事絲狀真菌檢測的檢驗人員應

作專業短期培訓；任何實驗室都應建立規范的涂片鑒

定方法，要正確區分酵母樣真菌或絲狀真菌、毛霉菌

和曲霉（有頂囊），對不常見的真菌不要輕易作為污

染菌報告。

(四) 結果報告

1. 藥敏崗位檢驗人員綜合真菌鑒定和藥敏結果形成檢

驗報告并簽名，微生物實驗室負責人或指定人按照相

關抗菌藥物試驗標準操作規程核對藥敏結果，尤其注

意異常和少見結果。

2. 告病人結果之前，應確定質控在可接受范圍。

3. 經雙人雙核后的報告單交報告發放員分發到各病房

或門診病人，注意簽收并記錄。缺乏審核者得報告結

果，應由微生物實驗室負責人或指定人在 24 小時內

進行評估。

4. 血培養陽性涂片為真菌和腦脊液墨汁染色發現隱球

菌的初步報告經核實后，按《三級報告程序》報告。

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5. 完成分析后的微生物標本，檢驗人員應按照《檢驗

后標本保存程序》安全保管標本和平板，要求有明確

標識以備復查。3-5 日后，由廢棄物處理崗位人員按

照《廢棄物處理程序》處理。

遇到來自臨床或病人對檢驗結果的抱怨，應按照《投訴與抱

怨處理程序》處理。

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