重組腸激酶的溶解方法和酶切條件

2023年12月12日發(作者：二十四孝圖魯迅)

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重組腸激酶的溶解方法和酶切條件

1.使用pH和緩沖液體系是什么？

? pH=8，緩沖液體系為25mM Tris-HCl 。

2.融合蛋白的使用量？

? 融合蛋白濃度0.1-1mg/ml（蛋白總量50-100μg），使用量為0.1-0.2U。每1U可酶切500μg融合蛋白。

3.酶切溫度和酶切時間？

? 酶切溫度為25℃，過夜酶切，或完全酶切需12h-16h。

4.咪唑存在是否影響酶切？

? 咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500μg蛋白）。

5.影響酶切的條件有哪些？如何解決？

若在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響。可參照以下推薦方法進行酶切：

? 為獲得理想酶切結果，請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進行酶切。

? 若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500μg蛋白）。

? 如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。

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