實驗二 牛乳中酪蛋白的分離

2023年12月18日發(作者：培養體系)

實驗二 牛乳中酪蛋白的分離

一、實驗目的

掌握從牛乳中分離酪蛋白的原理，學會操作方法。

二、實驗原理

牛乳中含有多種蛋白質，它們有著不同的性質，在脫脂牛乳的蛋白質中酪蛋白約占80%，酪蛋白是一類含磷蛋白質的復雜混合物。利用等電點時溶解度最低的原理，將牛乳的pH調到4.7（酪蛋白的等電點）時，酪蛋白就沉淀析出。再用乙醇和乙醚洗滌沉淀，除去脂類雜質，便可制得純酪蛋白。

三、實驗器材

1、實驗儀器

恒溫水浴、普通離心機、精密pH試紙或酸度計、布氏漏斗、抽濾瓶、表面皿、離心管（80 mL）、量筒、燒杯（100 mL）、玻棒、電子天平。

2、實驗材料

新鮮牛乳

3、試劑

1）95%乙醇

2）乙醚

3）0.2 mol/L醋酸溶液

先分別配制A 液和B 液：

A 液（0.2 mol / L 醋酸鈉溶液） 稱取分析純醋酸鈉（NaAc·3H2O）27.22 g溶于蒸餾水中，定容至1 000 mL。

B 液（0.2 mol / L 醋酸溶液） 稱取分析純冰醋酸（含量大于99.8%）12.0 g溶于蒸餾水中，定容至1000 mL。

取A液885 mL和B液615 mL混合，即得pH 4.7 的醋酸－醋酸鈉緩沖液1 500 mL。

四、實驗步驟

1、取10 mL鮮牛乳，置100 mL燒杯中，加熱至40 ℃。在攪拌下慢慢加入預熱至40 ℃、pH 4.7的醋酸–醋酸鈉緩沖溶液10 mL。

2、轉移至離心管中，在4000 r / min下離心10 min，棄上清，所得沉淀為酪蛋白的粗制品。

3、用20 mL蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀攪起，再次離心后棄上清。

4、向沉淀中加入10 mL 95%乙醇，把沉淀充分攪起至成懸濁液，將其轉移到布氏漏斗中抽濾，先用10 mL 95%乙醇洗滌，再用10 mL乙醚洗滌，最后抽干制得酪蛋白。

5、將酪蛋白白色粉末攤在表面皿上風干，于電子天平稱重，

五、實驗結果

計算得率（牛乳中酪蛋白理論含量為3.5 g/100 mL）。

六、注意事項

1、向牛乳中加入緩沖液時要緩慢，并充分攪拌。

2、在布氏漏斗中用95%乙醇和乙醚洗滌沉淀時要關閉抽濾漏斗。

3、在使用濾紙以前要先稱重，并做記錄。

七、問題與思考

1、為什么在牛乳中加入緩沖液后，還要再加幾滴0.2 mol / L的醋酸溶液？

2、用乙醇洗滌沉淀時，為什么要充分將沉淀攪起成懸濁液？