大黃素甲醚在設(shè)備制作靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用的生產(chǎn)技術(shù)_

2023年12月31日發(fā)(作者：安全文章)

圖片簡介:本技術(shù)提供了大黃素甲醚在制備靶向G四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用，屬于抗癌藥物技術(shù)領(lǐng)域。大黃素甲醚在制備靶向G四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用。原癌基因的啟動子區(qū)域可能形成G四聯(lián)體結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄過程解鏈時(shí)易形成的G四聯(lián)體結(jié)構(gòu)，所述大黃素甲醚作為小分子配體具有強(qiáng)烈的G四聯(lián)體結(jié)構(gòu)相互作用特征，增強(qiáng)G四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，從而實(shí)現(xiàn)對原癌基因過表達(dá)的抑制作用，發(fā)揮抗癌藥效。經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證明，與已知的能結(jié)合并穩(wěn)定G4結(jié)構(gòu)的小分子配體槲皮素和山萘酚相比，大黃素甲醚比槲皮素和山萘酚的影響更加顯著，尤其是呈現(xiàn)出比較獨(dú)特的使G四聯(lián)體形成核酸酶酶活性降低的作用，這表明大黃素甲醚具有較強(qiáng)的與G四聯(lián)體結(jié)構(gòu)相互作用的能力。技術(shù)要求1.一種具體如式(1)所示的大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用；2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述G-四聯(lián)體包括原癌基因形成的分子內(nèi)平行型G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述原癌基因包括c-myc、bcl-2、VEGF、Ret、c-kit1和Hif1a中的一種或多種。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，原癌基因c-myc的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，原癌基因bcl-2的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，原癌基因VEGF的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，原癌基因Ret的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.4所示。8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，原癌基因c-kit1的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.5所示。9.根據(jù)權(quán)利要求1～8任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，原癌基因Hif1a的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.6所示。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大黃素甲醚在藥物中的濃度為2～10μmol/L。技術(shù)說明書大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域

本技術(shù)屬于抗癌藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用。背景技術(shù)富含鳥嘌呤的脫氧核酸序列(DNA)或核酸序列(RNA)能在體內(nèi)外形成非經(jīng)典的核酸二級結(jié)構(gòu)，稱為G-四聯(lián)體(G4)。G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)在生理?xiàng)l件下具有高度的熱力酶松開，但當(dāng)DNA復(fù)制壓力增大時(shí)，G4結(jié)構(gòu)往往是基因組發(fā)生不穩(wěn)定的一個(gè)常見因素。許多原癌基因的啟動子區(qū)域含有可能形成該結(jié)構(gòu)的基序，稱為pG4 m轉(zhuǎn)錄過程中該富G序列的解鏈可能導(dǎo)致G4結(jié)構(gòu)的形成，而這將抑制原癌基因的轉(zhuǎn)錄和過表達(dá)。因此能夠特異穩(wěn)定G4結(jié)構(gòu)(包括癌基因及端粒G4)的小分子配體目前已報(bào)道的能穩(wěn)定G4的配體已經(jīng)不少，但普遍存在毒性過大的問題。例如應(yīng)用于臨床研究的四聯(lián)體靶向藥物CX-3543，雖然CX-3543是作為化療藥物用于晚相容性的原因沒有通過II期臨床實(shí)驗(yàn)。因此，四聯(lián)體靶向藥物的毒性問題是該研究領(lǐng)域亟待解決的重要方向。眾所周知，天然藥物經(jīng)過人們的長期實(shí)踐，在規(guī)定的劑量下副作用較小。有許多中藥及其活性成分具有抗癌作用，其中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些成分具有G四聯(lián)體小分子槲皮素和山萘酚等等，現(xiàn)有技術(shù)的報(bào)道發(fā)現(xiàn)它們也能夠穩(wěn)定特定的G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)并一定程度上影響某些原癌基因的過表達(dá)。這種抑制效應(yīng)是由與G-四聯(lián)體的制作用還不清楚，中藥來源的活性物質(zhì)作為G-四聯(lián)體小分子配體不易產(chǎn)生毒性。然而上述G-四聯(lián)體小分子配體只能對原癌基因形成的特定G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)有影癌藥物有限制。技術(shù)內(nèi)容有鑒于此，本技術(shù)的目的在于提供大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用，提供了一種新的靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物，穩(wěn)定體內(nèi)G4結(jié)構(gòu)的對癌基因?yàn)榱藢?shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本技術(shù)提供以下技術(shù)方案：本技術(shù)提供了一種具體如式(1)所示的大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用；優(yōu)選的，所述G-四聯(lián)體包括原癌基因形成的分子內(nèi)平行型G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)。優(yōu)選的，所述原癌基因包括c-myc、bcl-2、VEGF、Ret、c-kit1和Hif1a中的一種或多種。優(yōu)選的，原癌基因c-myc的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。優(yōu)選的，原癌基因bcl-2的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。優(yōu)選的，原癌基因VEGF的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示。優(yōu)選的，原癌基因Ret的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.4所示。優(yōu)選的，原癌基因c-kit1的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.5所示。優(yōu)選的，原癌基因Hif1a的啟動子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.6所示。所述大黃素甲醚在藥物中的濃度為2～10μmol/L。

本技術(shù)提供的具體如式(1)所示的大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用，原癌基因的啟動子區(qū)域含有可能形成G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的基序，轉(zhuǎn)錄過程解為小分子配體具有強(qiáng)烈的G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)相互作用特征，增強(qiáng)G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，從而實(shí)現(xiàn)對原癌基因過表達(dá)的抑制作用，發(fā)揮抗癌藥效。經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證配體槲皮素和山萘酚相比，大黃素甲醚比槲皮素和山萘酚的影響更加顯著，尤其是呈現(xiàn)出比較獨(dú)特的使酶活性降低的作用，這表明大黃素甲醚具有較強(qiáng)的與本技術(shù)提供的大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用，進(jìn)一步限定了所述G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)為原癌基因形成的平行型G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)，所述平行型G-四呈現(xiàn)反幾何特點(diǎn)。這種結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)是圓二色譜結(jié)果出現(xiàn)典型的260nm附近的一個(gè)大的正峰及240nm附近一個(gè)較小的負(fù)峰。經(jīng)圓二色譜法檢測實(shí)驗(yàn)表明，與端粒特點(diǎn)為：292nm正峰，端粒G-四聯(lián)體序列出現(xiàn)混合型特點(diǎn))相比，本技術(shù)提供的大黃素甲醚僅對平行型G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)具有強(qiáng)烈的相互作用，穩(wěn)定平行型G-四聯(lián)的。附圖說明圖1為圓二色譜法檢測G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)及部分藥品對G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的影響；圖2為部分陽性結(jié)果在適宜濃度時(shí)可觀察到顯色程度的明顯差異；圖3為RT-PCR檢測六種癌基因的mRNA表達(dá)水平的改變。具體實(shí)施方式本技術(shù)提供了一種具體如式(1)所示的大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用；在本技術(shù)中，原癌基因的啟動子區(qū)域含有可能形成pG4motif結(jié)構(gòu)的基序，轉(zhuǎn)錄過程解鏈時(shí)易形成的G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)，所述大黃素甲醚作為小分子配體具有強(qiáng)烈的穩(wěn)定性，從而實(shí)現(xiàn)對原癌基因過表達(dá)的抑制作用，發(fā)揮抗癌藥效。在本技術(shù)中，所述G-四聯(lián)體優(yōu)選包括原癌基因形成的分子內(nèi)平行型G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)。所述原癌基因優(yōu)選包括c-myc、bcl-2、VEGF、Ret、c-kit1和Hif1a中的一種選如序列表中SEQ ID No.1所示。原癌基因bcl-2的啟動子的核苷酸序列優(yōu)選如序列表中SEQ ID No.2所示。原癌基因VEGF的啟動子的核苷酸序列優(yōu)選如序列酸序列優(yōu)選如序列表中SEQ ID No.4所示。原癌基因c-kit1的啟動子的核苷酸序列優(yōu)選如序列表中SEQ ID No.5所示。原癌基因Hif1a的啟動子的核苷酸序列優(yōu)選在本技術(shù)中，在體外實(shí)驗(yàn)中，所述大黃素甲醚和形成G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的原癌基因核苷酸序列的質(zhì)量比優(yōu)選為2.5:1。所述大黃素甲醚在藥物中的濃度為2～10μm制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的大黃素甲醚的購買渠道即可。大黃素甲醚溶液的有效濃度優(yōu)選為DNA濃度的2.5倍。所述大黃素甲醚溶液的溶劑優(yōu)選為氯仿度優(yōu)選為2～10μmol/L，更優(yōu)選為4μmol/L。

在本技術(shù)中，驗(yàn)證大黃素甲醚作為小分子配體發(fā)揮抗癌藥效優(yōu)選采用體外檢測方法進(jìn)行。所述體外檢測機(jī)理如下：G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)可以與血紅素特異結(jié)合形成酶活性。在底物ABTS及H2O2存在時(shí)，該酶可催化反應(yīng)液在可見光波段出現(xiàn)特征吸收峰(A414)。其吸光度值的變化反映了GHC過氧化氫酶的活性。由于酶活的變化反映G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。在本技術(shù)中，所述抗癌藥物中大黃素甲醚的有效濃度優(yōu)選為5～10μmol/L。1mg大黃素甲醚溶于348μl氯仿得到10mmol/L母液，在-20℃條件下保存。使用時(shí)，用本技術(shù)對所述抗癌藥物的劑型沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的抗癌藥物的劑型即可。本技術(shù)對所述抗癌藥物的制備方法沒有特殊限制，采用本下面結(jié)合實(shí)施例對本技術(shù)提供的大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)的說明，但是不能把它們理解為對本技術(shù)保護(hù)范圍的限定。實(shí)施例1利用光譜學(xué)方法對大黃素甲醚和其他多種中藥活性成分對G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的影響1、溶劑的配制6種原癌基因啟動子區(qū)域的pG4(序列見SEQ ID No.1～6)以及端粒序列(SEQ IDNo.7)共7條DNA片段用水配成100μM母液，-20度儲存。(一)有分光光度計(jì)時(shí)：6種特定原癌基因啟動子區(qū)域的G-四聯(lián)體序列c-myc，5’TGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAAGG3’；(SEQ ID No.1)bcl-2，5’GGGCGGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG3’；(SEQ ID No.2)VEGF，5’GGGCGGGCCGGGGGCGGG3’；(SEQ ID No.3)Ret,5’GGGCGGGGCGGGGCGGG3’；(SEQ ID No.4)c-kit1，5’AGAGGGAGGGCGCTGGGAGGAGGGGCT3’(SEQ ID No.5)；Hif1a，5’GGGAGGGGAGAGGGGGCGGG3’；(SEQ ID No.6)。端粒序列基因啟動子區(qū)域的G-四聯(lián)體序列：Telo，5’TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTA3’(SEQ ID No.7)。用水將上述原癌基因啟動子區(qū)域序列配成100μM母液，-20℃儲存。待測小分子藥品包括大黃素甲醚和28種其他藥物活性物質(zhì)，部分藥物活性物質(zhì)具體見表1。40KT緩沖液(50mM MES,100mM Tris,40mM KCl,0.05％Triton X-100,1％DMSO,pH6.2)。特殊試劑：ABTS：2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)二銨鹽，Sigma貨號：A1888。2、實(shí)驗(yàn)方法參見表1。表1為不同稀釋度的大黃素甲醚對不同GHC酶的活性影響

選擇不同的實(shí)驗(yàn)濃度：上表1中列出了三種檢測濃度，取決于對照組的GHC酶活性的高低。原因是部分GHC在實(shí)驗(yàn)條件下顯色過快，很快就超過了儀器所能檢按2.5倍DNA濃度加入待測藥品小分子共29種，避光室溫靜置1h后加入同藥品濃度的hemin，避光室溫靜置0.5h。底物液濃度：ABTS 2mmol/L(用除氧水新鮮配后，立即計(jì)時(shí)并測定A414。數(shù)據(jù)處理結(jié)果在excel中表2記載。表2大黃素甲醚和其他中藥成分對7種GHC過氧化氫酶活性結(jié)果(N≥3)

注：+”或“－”均代表陽性結(jié)果，具體平均酶活性增加>10％記“+”，>20％記“++”>50％記“+++”，減少記為“－”依次類推；空白代表酶活性陰性結(jié)果。

由表2可知，具有顯著變化的12種活性成分。將定義酶活性變化幅度超過10％以上的結(jié)果為陽性。這提示它們可能與G4結(jié)構(gòu)存在較強(qiáng)的相互作用。其中槲皮素配體。在其他的分子中，大黃素甲醚比槲皮素和山萘酚的影響更加顯著，尤其是呈現(xiàn)出比較獨(dú)特的使酶活性降低的作用。篩選的分子中大黃素甲醚具有最強(qiáng)7種不同GHC的過氧化氫酶活性影響皆不顯著(1個(gè)“+”/“－”的陽性結(jié)果數(shù)目≤1)。這些藥品包括：黃藤素、大黃素、姜黃素、木犀草素、金雀異黃酮、扁桃苷、藤皂苷元、鹽酸黃連堿、冬凌草甲素、野黃芩苷、熊果酸及小檗堿。顏色反應(yīng)結(jié)果具體見圖2。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：6種原癌基因啟動子區(qū)域的pG4以及端粒序列共7條DNA片段，在體外G4折疊條件下(本方法中40mM 40KT緩沖液)與血紅素復(fù)合后加入底物，均表大。這說明，不同序列形成的G4結(jié)構(gòu)并不一樣。定量測定了7種GHC反應(yīng)前3～5min內(nèi)吸光度值的變化，發(fā)現(xiàn)對時(shí)間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(酶促反應(yīng)速率一般即我們用擬合直線的斜率來表征過氧化氫酶活性。因?yàn)椴煌珿CH酶活性高低不同，又將7種DNA分為三組，分別以2μM，4μM及10μM的DNA濃度開展定量篩選實(shí)施例2為了進(jìn)一步確認(rèn)大黃素甲醚與G4結(jié)構(gòu)的相互作用，使用了四聯(lián)體結(jié)構(gòu)研究中的常用方法-圓二色譜法(CD)測定上述不同G4結(jié)構(gòu)以及在與槲皮素、山萘酚、大(CD)是確認(rèn)G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)方法。所述標(biāo)準(zhǔn)方法具體包括以下步驟：檢測儀器：Applied Photophysics(英國)圓二色光譜儀。檢測體系：對實(shí)施例1中表1的GHC酶活性受槲皮素、山萘酚、大黃素甲醚影響超過20％以上的結(jié)果進(jìn)行了CD檢測。DNA濃度見圖1，溶于40KT，90℃，30mDNA濃度)后避光室溫靜置1h。Hemin：同藥品濃度，加入后避光室溫靜置0.5h。檢測條件：溫度20℃，徑寬2mm，HV(CDDC channel):239.822v，Time-per-poSize:1nm。數(shù)據(jù)處理：excel、SciDAVis。G4結(jié)構(gòu)具有不同的構(gòu)型，主要以連續(xù)G形成該結(jié)構(gòu)的四邊走向來區(qū)分。相鄰的連續(xù)G鏈空間走向出現(xiàn)一致的情況稱為平行型G4結(jié)構(gòu)。平行G4結(jié)構(gòu)在CD結(jié)果中實(shí)驗(yàn)條件40KT緩沖液中，6種癌基因的pG4序列均呈現(xiàn)出典型的平行型G4結(jié)構(gòu)，而端粒G4則呈現(xiàn)出混合型結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)(圖1-A)。僅Ret-GHC的結(jié)構(gòu)受大黃素甲醚影響發(fā)生了一定程度的改變(圖1-D)。其他結(jié)構(gòu)在藥品作用前后，CD幾乎沒有任何顯著變化。Hoostgen氫鍵形成的四個(gè)G組成它的空間結(jié)構(gòu)參數(shù)可能主要取決于序列本身包含的信息(如連續(xù)G之間的堿基類型和數(shù)量)以及緩沖液條件等。在一定條件下，小分子或者蛋白質(zhì)的結(jié)合并不會出大黃素甲醚與其具有相當(dāng)強(qiáng)烈的作用。實(shí)施例3大黃素甲醚具有穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)的檢測用Phen-DC3處理Mgs1功能缺失的細(xì)胞株，會引起細(xì)胞生長顯著變慢。這是因?yàn)镻hen-DC3增加了pG4處的復(fù)制壓力。在該體系中測試了大黃素甲醚的作用，具1、Mgs1Δ酵母株的構(gòu)建實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株為野生型W303 RAD5+釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，ein)及其背景上構(gòu)建的突變株。構(gòu)建Mgs1基因翻譯開放閱讀框缺失的方法見文27.)，破壞片段的制備：質(zhì)粒pRS304，引物5’-aatagcttat tagcagaaga acgctagcgg taagatctga aacaggatcgcacagtctca CGTTTCGGTGATGAC 3’(SEQ ID No.8)，5’-aaca1300bp。2、酵母倍增時(shí)間的測定ccttga TTCCTGATGCGGTATTTTCTCCT 3’(SEQ IDNo.9)，PCR條件：25μl體系，擴(kuò)增程序?yàn)?4℃4min一個(gè)循環(huán)，94℃，1min，52℃，45s，72℃，2min，35釀酒酵母細(xì)胞YEPD過夜培養(yǎng)后，重新接種至濃度OD6000.15，樣品組中加入大黃素甲醚(10μM)。在第一個(gè)90min后每60min記錄OD600值至達(dá)到1.5。通過以下μ＝(logOD2-logOD1)/loge(t2-t1)t倍增時(shí)間＝ln2/μ。表3大黃素甲醚對野生型及Mgs1Δ酵母株生長倍增時(shí)間的影響

基因型野生型無藥品Phen-DC3大黃素甲醚93.5±1.790.8±1.194.6±2.7Mgs1P值93.0±2.6104.5±3.299.0±1.70.1850.01860.0228近期發(fā)現(xiàn)釀酒酵母中的一種蛋白質(zhì)Mgs1(The yeast maintenance of genomestability 1)具有細(xì)胞內(nèi)處理G4結(jié)構(gòu)的能力。Phen-DC3是以前報(bào)道的一種能在體內(nèi)高度特Heddi，F(xiàn) .-.2014，53(4):999-1002.)。用Phen-DC3處理Mgs1功能缺失的細(xì)胞株，會引起細(xì)胞生長顯著變慢。這是因?yàn)镻hen-DC3由表3所示，在Mgs1Δ酵母株中，大黃素甲醚也能同樣引起細(xì)胞生長明顯變緩，結(jié)果說明，大黃素甲醚是一種潛在的體內(nèi)G-四聯(lián)體穩(wěn)定劑。實(shí)施例4細(xì)胞水平檢測若干癌基因的表達(dá)水平受大黃素甲醚的影響素甲醚的作用(表3列出了對比的數(shù)據(jù))。結(jié)果顯示在Mgs1Δ酵母株中，大黃素甲醚也能同樣引起細(xì)胞生長明顯變緩，雖然效果不及Phen-DC3影響大，但該結(jié)果大黃素甲醚、槲皮素和山萘酚分別處理乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，每個(gè)處理組設(shè)置3個(gè)平行，大黃素甲醚、槲皮素和山萘酚的處理濃度分別為5μmol/L。處理實(shí)時(shí)定量PCR的方法具體如下：Trizol法提取乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的總RNA，分光光度法定量及檢測總RNA質(zhì)量。SYBR Green法(Premix Ex TaqTMII，TaKaRa，中國序如下：98℃預(yù)變性5min；95℃變性20c，55℃退火30c，72℃延伸1min，共運(yùn)行40個(gè)循環(huán)；然后運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)溶解曲線。目標(biāo)基因的相對表達(dá)量用2-ΔΔCt表4擴(kuò)增6個(gè)癌基因及內(nèi)參基因的引物信息

結(jié)果見圖3。圖3為RT-PCR檢測六種癌基因的mRNA表達(dá)水平的改變。槲皮素和山萘酚是已有報(bào)道的，具有抗癌效果的天然藥物活性成份，而大黃素甲醚目前實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大黃素甲醚對c-myc，bcl2，Ret，Hif1a等癌基因的表達(dá)具有明顯的抑制效果。而且相比槲皮素和山萘酚，大黃素甲醚在本實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出最高以上所述僅是本技術(shù)的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些序列表<110>

南京醫(yī)科大學(xué)<120>

大黃素甲醚在制備靶向G-四聯(lián)體抗癌藥物中的應(yīng)用<160> 23<170> SIPOSequenceListing 1.0<210> 1<211> 24<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 1tgagggtggg gagggtgggg aagg 24<210> 2<211> 27<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 2gggcgggcgc gggaggaagg gggcggg 27<210> 3<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 3gggcgggccg ggggcggg 18<210> 4<211> 17<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 4gggcggggcg gggcggg 17

<210> 5<211> 27<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 5agagggaggg cgctgggagg aggggct 27<210> 6<211> 20<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 6gggaggggag agggggcggg 20<210> 7<211> 27<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 7ttagggttag ggttagggtt agggtta 27<210> 8<211> 75<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 8aatagcttat tagcagaaga acgctagcgg taagatctga aacaggatcg cacagtctca 60cgtttcggtg atgac 75<210> 9<211> 83<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 9aacagagaaa aaaatatgaa ttgtagacgc ggcattgaga gaagtatgga agacccttga 60ttcctgatgc ggtattttct cct 83

<210> 10<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 10gctgccaaga gggtcaag 18<210> 11<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 11cgcacaagag ttccgtag 18<210> 12<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 12gtcgtctccg aagatttg 18<210> 13<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 13ggattgccct gattattt 18<210> 14<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 14cgttctgctc ctactgct 18<210> 15<211> 19

<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 15cgttgtcttc tttcccata 19<210> 16<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 16tggagcgtgt acgttggt 18<210> 17<211> 21<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 17tgtatcagtc tttcctggtg a 21<210> 18<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 18ttctggatgc tggtgatt 18<210> 19<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 19cctcggctag ttagggta 18<210> 20<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20aaagtggtca aggcaacg 18<210> 21<211> 18<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 21gagccgtatt tggcgtac 18<210> 22<211> 20<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 22tctgatttgg tcgtattggg 20<210> 23<211> 19<212> DNA<213>

人工序列(Artificial Sequence)<400> 23ggaagatggt gatgggatt 19