實驗四 葡萄果實中花色苷提取與測定

2024年1月4日發(作者：貽笑大方)

實驗四 葡萄果實中花色苷提取與測定

一、實驗目的

1、了解并掌握葡萄果皮中花色苷提取的原理和操作；

2、掌握葡萄果皮重花色苷含量的測定方法和步驟。

二、實驗原理

花色苷是紅色葡萄果實中一類非常重要的呈色物質，并且多數情況下主要存在于果皮當中，只有極少數染色品種的果肉中存在花色苷。花色苷主要有花色素（包括花翠素、花青素、甲基花青素、甲基花翠素及二甲花翠素）經過羥基化后以單體糖苷的形式存在。

三、實驗材料

紅色葡萄果實、吸水紙、研缽、研杵、液氮、分光光度計等

四、主要項目和方法

1、果皮花色苷提取

把每個樣本（20粒）的葡萄果皮取下，然后用蒸餾水沖洗果皮，除去果皮粘連的部分果肉與糖分等并用吸水紙吸干，進行稱重（M），然后再液氮中將果皮研

磨成粉末，準確稱取3.0000g粉末放入50ml離心管中，加入30ml酸化甲醇溶液（1mol/L HCl/MOH/水，1/80/19，v/v/v），在100%功率條件下超聲輔助提取30min，溫度控制在25攝氏度，然后將其只置于低溫離心機中離心（8000r/min）15min，收集上清液。向殘渣中繼續加入30ml酸化甲醇溶液，在此按照上述步驟進行提取，重復4次，合并所有上清液（120ml）于細口瓶中，-20攝氏度避光保存。

2、花色苷含量測定和計算

采用pH示差法，提取液分別用pH值為1.0鹽酸-氯化鈉緩沖液稀釋20倍。然后分別在510nm與700nm下測定兩種稀釋液的吸光度。吸光度A為：

A=(??510????-??700????)pH1.0 - (??510????-??700????)pH4.5

花色苷含量用矢車菊素-3葡萄糖苷（???????? , mg/g）表示，即

????????=（A × MW × DF × Ve × 1000）/（ε × 1 × M）

式中 MW-矢車菊素-3葡萄糖苷相對分子量，取449

DF-稀釋倍數

Ve-提取液總體積

M-葡萄皮質量

ε – 摩爾吸光系數，取29600

五、實驗結果

吸光值

pH

1.0

4.5

0.9007

0.0813

0.0087

0.0065

??510???? ??700????

A=0.9007-0.0087-(0.0813-0.0065)=0.8172nm

????????=

因此該葡萄果實中，花色苷含量為 mg/g。

六、實驗總結

花色苷是花色素與糖以糖苷鍵結合而成的一類化合物，是類黃酮——以黃酮核為基礎的一類物質中能呈現紅色的一族化合物。它是葡萄果實中重要的呈色物質，主要存在與果皮中。通過了解花色苷的相關特性以及掌握花色苷的提取原理和技術，可以更好地完成葡萄果實中花色苷的提取，為后續研究奠定基礎。