辣根過氧化物酶（臨床檢驗試劑中的常用酶）

辣根過氧化物酶（臨床檢驗試劑中的常用酶）

辣根過氧化物酶 （臨床檢驗試劑中的常用酶） 次瀏覽 | 2022.08.25 11:19:55 更新 來源 ：互聯網 精選百科 本文由作者推薦 辣根過氧化物酶臨床檢驗試劑中的常用酶

過氧化物酶，通常來源于辣根（因此稱辣根過氧化物酶），是臨床檢驗試劑中的常用酶。該產品不但廣泛用于多個生化檢測項目，也廣泛運用于免疫類（ELISA）試劑盒。過氧化物酶作為多個試劑盒顯色體系的關鍵成分，對試劑盒的質量有重要影響。

中文名

辣根過氧化物酶

外文名

Horradish Peroxida,HRP

酶學分類號

EC1.11.1.7

來源

辣根

簡介該酶催化

Donor+H2O2--→Oxidized donor+2H2O。

辣根過氧化物酶（Horradish Peroxida,HRP）比活性高，穩定，分子量小，純酶容易制備，所以最常用。HRP由多個同功酶組成，分子量為40,000，等電點為PH3～9，酶催化的最適PH因供氫體不同而稍有差異，但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白最大吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以OD403nm/OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的純度。高純度的酶RZ值應在3.0左右（最高可達3.4）。RZ值越小，非酶蛋白就越多。

用途

1）RZ>3活性>250u/mg，主要應用于免疫學，是高純度的過氧化酶。采用特殊色譜純化技術以除去會影響免疫學反應的同工酶B。

2）RZ>2活性>180u/mg，主要應用于臨床化學，我們的客戶也有將這個規格的產品應用于免疫學研究的。此時，一個標準化的分析方法就變得尤為重要。

3）RZ>1活性>100u/mg，主要應用于血糖試紙和尿液分析試紙。

4）RZ>0.6活性>60u/mg，主要應用于尿液分析試紙。

抗體制備技術

辣根過氧化物酶(horradish?peroxida，HRP)廣泛分布于植物中，因辣根中含量最高而得名，由無色酶蛋白和深棕色鐵卟啉(輔基)構成一種糖蛋白(含糖18%)。[1]此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液。

HRP分子量較小(40kDa)，標記物容易穿透入細胞內部;作用底物為H2O2，以二氨基聯苯胺(DAB)為供氫體的反應產物為不溶性的棕色吩嗪衍生物，可用普通光鏡觀察；在pH3.5~12范圍內穩定，對熱及有機溶劑的作用亦較穩定，能耐受63℃加熱15min;用甲苯與石臘包埋切片處理或用純乙醇及10%甲醛水溶液固定作冰切片均不影響其活性；

溶解性好，100mL緩沖鹽溶液中可溶解5gHRP，并可溶解于62%飽和度以下的硫酸銨溶液中，故常用硫酸銨分級沉淀法分離純化;氰化物、硫化物、氟化物、及疊氮化物等對HRP的活性有抑制作用，應避免使用NaN3作為酶標試劑的防腐劑，以防止失活。

凡能在HRP和H2O2存在時被酶催化H2O2反應而和成有色產物的化合物(供氫體)都可以用顯色劑。供氫體的產物分不溶性和可溶性兩類。前者最常用的為3，3'二氨基聯苯胺(3,3'diaminobenzidine,DAB)，適用于免疫組化法;反應后的氧化型中間體迅速聚合，形成不溶性棕色吩嗪衍生物;這種多聚物還能還原和螯合四氧化餓，形成具有電子密度的產物，適用電鏡檢查;此外還有飽和聯苯胺溶液，氧化后產物呈黃褐色，多用于酶免疫擴散的深沉線顯色。

后者最常用的為鄰苯二胺(O-phenylene?diamine,OPD)，產物橙色，可溶性、敏感性高，最大吸收值為490nm，可用肉眼判別;易被濃酸終止反應，顏色可數小時不變，是ELISA中最常用的一種;但對光敏感，使用時要避光，并發現有致癌作用。

用HRP標記抗體需借助交聯劑的作用，將酶連接在抗體分子上。常用的交聯劑為過碘酸鈉和戊二醛(glutaraldehyde,CHO-(CH2)3-CHO)。

參考資料