高效液相色譜分析(高效液相色譜分析的基本原理)

高效液相色譜分析的基本原理

高效液相色譜分析的基本原理：使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，最后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。

補充說明：

高效液相色譜儀(HPLC)是應用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。

它由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中做相對運動時，經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。

高效液相色譜儀（HPLC）廣泛應用于生命科學、食品科學、藥物研究以及環境研究中。

高效液相色譜分析法的原理是什么？

高效液相色譜分析原理：
（一）高效液相色譜分析的流程：由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統，然后輸出，經流量與壓力測量之后，導入進樣器。被測物由進樣器注入，并隨流動相通過色譜柱，在柱上進行分離后進入檢測器，檢測信號由數據處理設備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而HPLC改變的是流動相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。
（二）高效液相色譜的分離過程：同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續多次交換過程。它借溶質在兩相間分配系數、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。
開始樣品加在柱頭上，假設樣品中含有3個組分，A、B和C，隨流動相一起進入色譜柱，開始在固定相和流動相之間進行分配。分配系數小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數大的組分C在固定相上滯留時間長，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數介于A，C之間，第二個流出色譜柱。若一個含有多個組分的混合物進入系統，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數的不同先后流出色譜柱，達到分離之目的。
不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學平衡問題，也是分離的首要條件。其次，當不同組分在色譜柱中運動時，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴散系數、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關。所以分離最終效果則是熱力學與動力學兩方面的綜合效益。

如何分析高效液相色譜圖

分析色譜圖的方法：

手動進樣步驟 配置好流動相，將濾嘴洗頭放入流動相頁面內，打開泵和檢測器，快跑排除氣泡，設置既定流速，穩定一段時間，讓基線跑平，用液相針吸取稱量融配脫氣后的對照（含量已標定）。

打開定量環將液相針里的液體勻速注入定量環中，拔出針頭好立刻關閉六通閥，一般隨六通閥關閉電腦自動采樣，等主峰跑完整后記錄其峰面積，一般跑兩個對照，每個對照跑兩針，共四針。

然后開始注稱好溶配脫氣后的樣，以對照主峰的保留時間來判斷樣品中目標峰的位置，外標法以峰面積計算供試品中某物質的含量。

X=[S樣*K /m樣（1-水分）]*對照品含量% *100

擴展資料

高效液相色譜法有“四高一廣”的特點：

①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

②高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時。

③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。

⑤應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

⑥柱子可反復使用：用一根柱子可分離不同化合物

⑦樣品量少、容易回收：樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。

參考資料百度百科高效液相色譜

如何分析高效液相色譜圖

色譜圖，其實簡單地講，是一個橫坐標是時間，縱坐標是電信號的二維圖譜。
高效液相色譜法，你可以簡單地想象，固定相是一個多空海綿狀的柱形結構，樣品在孔洞中進進出出。因為各個物質的吸附能力不同，所以才會在色譜圖中拉開距離。
和實驗相關的參數：
1、保留時間-也就是可以定性的數據參數
如果使用同樣的色譜柱，同樣的流動相，分析同樣的樣品，那么這個樣品的保留時間，應該是固定的。不同保留時間的色譜峰，應該表現出的是不同的物質。如果你跑的是反相色譜，那么色譜峰越靠后，它對應物質的極性也就越小。
2、峰面積-也就是可以定量的數據參數
這是你在色譜圖中可以讀出來的參數，在同一個色譜條件下，同一個物質的濃度和峰面積是成正比的。也就是說，如果你配制1.0mg/ml的X物質，進樣后峰面積是10000，那么，你配制0.5mg/ml的X物質，進樣后峰面積差不多就是5000
3、波長-這個是可以順利進行試驗的前提條件
同一樣品，同一方法，同一色譜柱，在不同波長的峰面積是不同的。一個物質指在某些特殊波長下有吸收。比如一個物質在210nm和254nm處有吸收。那么波長在280nm處可能無法檢出該物質。所以一個實驗方法開始時要進行波長掃描。

高效液相色譜法原理 高效液相色譜法有何特點

1、高效液相色譜法的原理是以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測。

2、高效液相色譜法有“四高一廣”的特點：

（1）高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

（2）高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時。

（3）高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

（4）高靈敏度：紫外檢測器可達0。01ng，進樣量在μL數量級。

（5）應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

高效液相色譜法有哪些特點

1、高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

2、高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，小于1小時。

3、高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

4、高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。

5、應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

6、柱子可反復使用：用一根柱子可分離不同化合物

7、樣品量少、容易回收：樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

高效液相色譜分析的流程

由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統，然后輸出，經流量與壓力測量之后，導入進樣器。被測物由進樣器注入，并隨流動相通過色譜柱，在柱上進行分離后進入檢測器，檢測信號由數據處理設備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。

遇到復雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，

而HPLC改變的是流動相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。

以上內容參考：百度百科-高效液相色譜、百度百科-高效液相色譜分析法