南極假絲酵母脂肪酶B在畢赤酵母的表達及學性質(zhì)研究

2023年12月4日發(fā)(作者：生產(chǎn)成本控制)

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南極假絲酵母脂肪酶B在畢赤酵母的表達及學性質(zhì)研究

孫金鵬;錢圣一;敬科舉;盧英華

【期刊名稱】《廈門大學學報（自然科學版）》

【年(卷),期】2011(050)004

【摘 要】為提高南極假絲酵母脂肪酶B( Candida antarctica lipa B,CALB)的表達量,根據(jù)畢赤酵母(Pichia pastoris)密碼子偏好性設計合成CALB基因,插入表達載體pPIC9K構建重組質(zhì)粒pPIC9K-CALB.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115,經(jīng)過G418抗性篩選得到多拷貝轉(zhuǎn)化子.搖瓶發(fā)酵120 h后上清液酶活力達到46 U/mL,通過金屬螯合層析純化發(fā)酵液將CALB純化了5.23倍,比活力達到856.7 U/rg,去糖基化實驗顯示重組CALB比野生型CALB大5 ku.實驗考察了不同反應溫度、pH值和金屬離子對重組CALB活性和穩(wěn)定性的影響,發(fā)現(xiàn)重組CALB最適反應溫度和pH分別為30℃和6.5,在pH 5.0～8.0之間以及40℃以下有較好穩(wěn)定性,金屬離子(10 mmol/L)Ca2+,Zn2+,Mn2+有助于CALB酶活力的提高,而Cu2+,Ag+,Fe3+強烈抑制酶催化反應.%To improve expression efficiency of recombinant

Candida antarctica lipa B (CALB) in methylotrophic yeast Pichia pastoris

GS115,the DNA quence encoding CALB was designed and synthesized

bad on the codon bias of P. Pastoris. The new CALB gene was cloned

into pPIC9K,yielding pPIC9K-CALB,and transformed into P. Pastoris GS115.

In shake-flask cultivation, the enzyme activity was 46 U/mL after induction

by methanol for 120 h. The CALB was purified by metal chelate

chromatography by 5. 23 folds. Deglycosylation showed the recombinant

CALB was 5 ku bigger than wild type CALB. The optimal pH and temperature of this recombinant enzyme were pH 6. 5 and 30°C,

respectively. CALB was relatively stable at temperatures below 40 ℃ within

a pH range from 5. 0 to 8. 0. Ca2+ ,Zn2+ ,Mnz+ conduced to enzyme

activity, while Cu2+ , Ag+ ,Fe3+ inhibited it.

【總頁數(shù)】7頁(P765-771)

【作 者】孫金鵬;錢圣一;敬科舉;盧英華

【作者單位】廈門大學化學化工學院,福建廈門361005;廈門大學化學化工學院,福建廈門361005;廈門大學化學化工學院,福建廈門361005;廈門大學化學化工學院,福建廈門361005

【正文語種】中 文

【中圖分類】Q781

【相關文獻】

1.表面展示南極假絲酵母脂肪酶B的重組畢赤酵母高密度發(fā)酵條件優(yōu)化 [J], 馮琮;林影;梁書利;蘇國棟;韓雙艷

2.表面展示南極假絲酵母脂肪酶B的畢赤酵母FM22發(fā)酵培養(yǎng)基響應面優(yōu)化 [J],

陳明祥;謝萬勇;廖錫豪;陳家駒;韓雙艷;林影

3.南極假絲酵母脂肪酶B在畢赤酵母中的分泌型表達及酶學性質(zhì)初探 [J], 李迅;鄧若冰;王飛

4.畢赤酵母展示表達南極假絲酵母脂肪酶B [J], 蘇國棟;張少平;尹鈺;林影

5.南極假絲酵母(Candida antarctica)脂肪酶A在畢赤酵母中的表達、純化及性質(zhì)

[J], 徐同成;李霞;馬曉航;岳珂;開雷;李鐸

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