高效液相色譜法測定酒類中總糖含量

2023年12月10日發(作者：論美)

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高效液相色譜法測定酒類中總糖含量定酒類中總糖方法可靠、數據準確、方便快速。科技文苑□ 吳國輝 王柳玲 鄧偉恒 廣州檢驗檢測認證集團有限公司摘　要：酒類中總糖的測定國標指引方法多為滴定法，但該法操作步驟多、費時長、效率低，影響因素也多，特別是含糖量較多的色酒、配料雜的酒等，其滴定終點難以判定，容易導致測量結果產生誤差。本文結合幾種酒類中糖的成分，通過高效液相色譜法測定酒類中的5種糖，從而計算出總糖含量。通過一系列實驗對比，結果表明用液相色譜法測關鍵詞：酒類 總糖 高效液相色譜法和多糖（淀粉、纖維素等），不同類型的酒含有不同的糖，葡萄酒、果酒主要含果糖、葡萄糖；黃酒主要含葡萄糖；而糖主要包括單糖（葡萄糖、果糖等）、雙糖（蔗糖、乳糖等）1 材料與方法1.1 儀器與試劑大部分的配制酒添加了白砂糖，即主要含蔗糖，所以酒的總糖主要為果糖、葡萄糖、蔗糖三者的加和。糖在酒中發揮著重要作用，如改善口感，但糖會帶來一定的健康問題，如肥胖、糖尿病、高血壓等。總糖是食品的重要成分之一，總糖含量也是食品行業中評價產品質量、營養、風味的指標之一[1]，因此為了保證和控制酒的質量，建立簡單、可靠且快速的糖類物質成分分析及含量測定方法具有重要意義。差檢測器；果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖標準品，驗室自制；乙腈（色譜純）；酒樣購自本地超市。Waters e2695高效液相色譜儀，配備Waters 2414示來源于torfer GmbH；超純水（18.2MΩ），實1.2 標準溶液配制滴定法[2]適用于果酒、葡萄酒、露酒；亞鐵氰化鉀滴定法[3]適用于干、半干黃酒；廉愛農法[3]適用于甜、半甜黃酒。以目前，國內對酒的總糖檢測方法主要是滴定法——直接乳糖標準品各0.25g（精確至0.1mg）于50mL燒杯中，用超混合標準儲備液：分別稱取果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、[6]純水溶解，轉移并定容至25mL容量瓶中，保存在4℃冰箱中。4.00mL、5.00mL混合標準儲備液于10mL容量瓶中，用超純水定容至刻度。混合標準工作液：分別取1.00mL、2.00mL、3.00mL、上方法都有一個共通點，就是對樣品中總糖含量、實驗過程中的加熱溫度、滴定操作、滴定速度以及實驗人員技術等要求嚴格[4]。滴定法操作步驟多、費時長，影響因素也多，特別是含糖量較多的色酒、配料雜的酒，此類產品終點難判定，1.3 樣品前處理容易導致測量結果產生誤差，而通過加入活性炭對有顏色的酒吸附脫色再測定，可以使樣品變為無色，從而使滴定終點容易判定。但有結果表明，不論在何種條件下，隨著活性炭添加量的增加,吸附色素效果增強的同時吸附的糖也隨之增加，吸附時間越長，活性炭吸附的糖越多，致使測得結果偏低[5]。此外，不同類型的酒采用不同的滴定法，也會導致每可直接過0.45μm微孔濾膜至進樣瓶，供高效液相色譜分析。

酒類樣品基質相對簡單，不含蛋白質、脂類等復雜物質，1.4 液相色譜條件色譜柱：Athena NH2，120A，4.6×150mm，3μm。流動相：乙腈+水=75+25（V/V）。流速：1.0mL/min。天處理的樣品量少，效率低。高效液相色譜法具有普及率高、操作簡便、快速、分離效果好等優點，是目前檢測糖類物質的主要手段。本文將通過優化液相色譜分離的條件檢測酒類中的幾種糖，結合酒類中糖的主要成分，建立高效液相色譜法測定酒類中總糖的方法。進樣量：10μL；柱溫：30℃；采集時間：15min。檢測器溫度：35℃。2 結果與分析2.1 色譜條件的優化Jun 2018

CHINA FOOD SAFETY 61Copyright?博看網 . All Rights ry行業科技文苑2.1.1 流動相的選擇本實驗選擇色譜柱溫度為30℃，目標峰保留時間適宜且分離度佳。動相，實驗結果發現，增加乙腈的比例時，峰形有效改善，在70%~80%范圍內考察不同比例的（乙腈+水）流有利于各組份的分離，但分析時間會延長；當增加水的比例時，分析時間變短，但分離度變小，且水的比例過大時，使靈敏度降低。綜合考慮分離效果、分析時間等因素，選化后的液相色譜條件分離5種糖的色譜圖，如圖1所示，譜圖，如圖2所示，糖分離度良好，峰形對稱。不利于流動相在漂移管內的汽化，使基線噪聲增大，從而擇乙腈+水為75+25（V/V）的體系作為流動相。使用優5種糖分離良好，峰形對稱。同一條件分析某一酒樣的色圖1 5種糖混合標準溶液色譜圖7.354-蔗糖、8.579-麥芽糖、9.644-乳糖。注 ：按出峰時間順序依次是，4.805-果糖、5.407-葡萄糖、圖3 不同色譜柱溫度對糖的色譜峰影響（出峰時間順序與圖2一致）2.2 方法學考察2.2.1 線性關系考察分別以各分析物的峰面積（y）和對應的質量濃度系數，見表1，各組分呈線性關系，相關系數均大注：按出峰時間順序依次是，4.803-果糖、5.401-2.1.2 色譜柱溫度的優化實驗考察了色譜柱溫度（20~40℃）對樣品中糖的檢圖2 酒樣品色譜圖參照1.2節方法配制糖混合標準工作溶液，（x，mg/mL）作標準曲線，得到線性方程和相關于0.999。分析物葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖果糖表1 5種糖的線性方程和相關系數葡萄糖、8.491-麥芽糖、9.467-乳糖。y=64270x+585y=66955x+390y=64325x-957回歸方程相關系數0.999970.999790.999870.999810.99985測的影響，如圖3所示。隨著色譜柱溫度的升高，色譜峰保留時間提前，分析時間縮短，但是隨著柱溫的升高，色譜峰的峰形會變得不規則；而色譜柱溫過低，保留時間相近的目標峰分離效果不佳。綜合考慮分析時間與分離度，y=586489x-1275y=570787x-285662

食品安全導刊 2018年6月Copyright?博看網 . All Rights Rerved.科技文苑2.2.2 加標回收率和精密度試驗為驗證方法的準確度，把某一樣品和混合標準簡單的過濾膜處理直接上機，示差檢測器檢測，外標法定量測定酒類的糖，從而計算出總糖含量，建立了高效液相色譜法測定酒類的總糖。該方法操作簡單、2:11:1快速，定量準確，重現性好，適用于酒類中總糖的測定。儲備液按一定比例進行了3個梯度的加標回收實驗表2 某一酒樣中5種糖的加標回收率和精密度樣品名稱果糖回收率(%)90.192.797.53:1RSD(%)1.11.01.2回收率(%)102.095.995.999.1RSD(%)0.81.1回收率(%)96.597.3RSD(%)1.20.9葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖92.61.31.495.81.396.11.595.01.1100.397.31.01.41.0（n=6），實驗結果見表2。5種糖的平均回收率為90.1%~102%，相對標準偏差（RSD，n=6）在0.8%~1.5%之間，方法顯示了良好的準確性和重現性。2.3 具體樣品分析采用本方法檢測15個具有代表性酒樣品中果糖、參考文獻：[1] 黎濤.總糖測定中取樣量的確定[J].熱帶作物機械化,1998(02):19-21.[2] GB/T 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法[S].[3] GB/T 13662-2008 黃酒[S].[4] 吳東林，張建寧，于飛，閆飛.對國標GB/T

15038-2006中總糖還原糖測定方法的改進[J].科技風，2009(07):29.[5] 江龍發.干紅葡萄酒中總糖快速測定技術研究[D].南昌大學，2015.[6] GB 5009.8-2016食品安全國家標準 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定[S].葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的含量，從而計算出總糖含量，將本方法與現行的國家標準方法進行比較。結果如表3所示，兩種方法的測定結果較為一致。結果表明，本方法簡單、準確、快速，可用于酒類中總糖含量的測定。3結論本研究通過優化液相色譜分離的條件，樣品經過樣品名稱果糖1.3333.9534.0121.110016.6435.84.23葡萄糖1.7219.6829.8430.210.3119.7716.4042.2060.8941.5910.1123.617.927.604.31表3 本法測定酒類中5種糖含量與國家標準方法檢測結果的比較（單位：g/L）1-干紅葡萄酒4-百香果酒5-青梅酒蔗糖0000麥芽糖0.600.110.180.42000乳糖0.300.3300.240.4100000本法總糖3.9554.0664.680.3186.8659.7218.30101.7828.3054.6748.02119.1078.008.98國標總糖3.9954.5064.800.4086.9960.1118.79120.10102.1128.9255.0148.2278.219.053-特種葡萄酒（甜型）6-桑葚果酒2-半干葡萄酒35.210008-塔牌五年紹興花雕酒（半干型)9-古越龍山紹興黃酒（半甜型）11-RIO 5度青梅味伏特加雞尾酒12-雙鶴玫瑰露酒13-椰島海王酒14-桑果露酒15-枸杞山藥酒10-會稽山甜型糯米黃酒7-清爽型干黃酒23.311.9000.7900000059.4112.017.46858.2124.4139.618.1106.1800000024.0324.31Jun 2018

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