總花色苷含量測定

2024年1月4日發(作者：高考方案)

總花色苷含量測定—分光光度法

1、綜合國內外資料,主要有以下幾種計算吸光值A 的方法[1]:

(1) 當葉綠素是該樣品中主要存在的干擾色素時,需消除葉綠素吸收含量的影響;此時,計算公式為: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620)

(2) 含有其它干擾物質時花色苷總量的測定:

a) 直接法:在新鮮的植物提取物中,因為很少含有在花色苷的最大吸收區發生吸收的干擾物質,花色苷總量可以直接由可見區最大吸收波長處的吸光度來測定。

計算公式為: A = Amax

直接法吸收光譜測定:用××分光光度計于250 - 800nm 下全波長掃描,得到花色苷在0.1 % 鹽酸—80 % 乙醇中的可見光區最大吸收波長,在此最大波長下測定各樣品的吸光值A 。

b) pH 示差法:在加工或儲藏過程中,會產生褐色降解物,這些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范圍。這類花色苷總量的測定,通常用pH示差法[8] 。

計算公式為: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5

pH 示差法吸收光譜測定:先確定合適的稀釋因子,使樣品在λmax下的吸光度在分光光度計的線性范圍內;然后制備兩個樣品稀釋液,其中一個用氯化鉀緩沖液(0.025M,pH1.0) 稀釋,另一個用醋酸鈉緩沖液(0.4M,pH4.5) 稀釋,將稀釋液平衡15min

后,用蒸餾水做空白,分別測定兩種樣品稀釋液在λmax和700nm處的吸光值A。

2、花色苷總含量的測定[2]：通過波長掃描,確定××花色苷在可見區的最大吸收波長為λmax。利用花色苷的結構特性,當pH為1.0時在λmax處有最大吸收峰,而當pH為4.5時,花色苷轉變為無色查爾酮形式,在λmax處無吸收峰,用示差法計算溶液中總花色苷含量。

計算公式為: C (mg/ g) = (A0 - A1) ×V ×n ×M / (ε×m )

式中: A0 、A1 —分別為pH1.0、pH4.5時花色苷在λmax處的吸光值

V —提取液總體積(mL )

n —稀釋倍數

M —cy-3-glu (矢車菊- 3-葡萄糖苷)的相對分子質量(449.4)

ε—cy-3-glu的消光系數( 29600)

m —樣品質量( g)

3、花色苷含量TAcy的計算公式為(以天竺葵色素-3-葡萄糖苷計)[3] :

TAcy (mg/ hg) =(A ×433 ×10 ×V）÷(22 400 ×m)×100

A = (OD500nm - OD700nm) pH1.0 - (OD500nm -OD700nm) pH4.5

式中: V — 提取液的總體積(mL)

m — 取樣量(g)

22 400 —天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩爾消光系數

433 — 天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩爾分子量。

4、花色苷含量測定[4]

樣品處理: 將各品種的干燥樣品粉碎(40目)后,準確稱取0.5 g用10 mL 65%的酸性乙醇提取24 h,提取3次,然后將3次提取液混合抽濾,真空旋轉揮發回收乙醇,用蒸餾水定容到100 mL,搖勻,靜止備用。

測定方法:含量測定用pH示差法,按照下面公式計算,測定3 次取其平均值。

C(mg/L ) = (OD ×M ×DF ×1000)/ α×1

式中: OD 為吸光度, DF為稀釋倍數,M 為分子量,α=26900。

花色苷[5]：將提取液稀釋合適倍數，用1cm 比色杯測其吸光值，參照Fuleki[6]的計算方法轉換成總花色苷濃度，公式如下：

C/(mg/mL)=(A×MW × DF × 1000)/(ε×1)

式中：A為吸光值；MW 為分子量（以矢車菊素-3-葡萄糖苷為標準[7]，449.4）；

DF為稀釋倍數；ε為消光系數，26900 -1。

參考文獻

[1] 霍琳琳,蘇平,呂英華, 分光光度法測定桑葚總花色苷含量的研究[J]. 釀酒, 2005 年7月,第32卷第4期.

[2] 李穎暢,孟憲軍,張琦,于娜，藍莓果主要物質含量及處理方式對其花色苷的影響[J]. 食品工業科技, Vol. 29, N o. 05, 2008.

[3] 盛小娜,王璋, 不同預處理方式對速凍草莓花色苷含量的影響[J]. 冷飲與速凍食品工業, 2006年12月第12 卷第4期.

[4] 王振江,肖更生，廖森泰等，不同品種桑椹的抗氧化作用與其花色苷含量的相關性研究[J]. 蠶業科學， 2006，32(3).

[5] 呂英華，蘇平，那宇，李輝, 桑椹色素體外抗氧化能力研究[J]. 浙江大學學報(農業與生命科學版) 33(1)：102～107，200

[6] Fuleki T， Francis F J． Quantitative methods for anthocyanins． 1． Extraction and

determine-ation of total anthocyanin in cranberries．D]．Food Sei．，1968.33：72-78

[7] Suh H J，Noh D 0，Kang C S，eta1．Thermal kinetics of color degradation of mulberry

fruit extract D]．Nahrung Food．2003．47(2)：132—135

[8] Ronald E1Wrolstad , Steven J1Schwartz , M Giusti1Handbook of Food Analytical Chemistry

Water , Proteins , Enzymes , lipids , and Carbohy2 drates[M]1Wiley US ,20051