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            抗菌脂肽Surfactin的抗菌活性及應用

            更新時間:2024-03-12 16:07:18 閱讀: 評論:0

            2024年3月12日發(作者:通感的作用)

            抗菌脂肽Surfactin的抗菌活性及應用

            動物營養學報2015,27(5):1333—1340 

            Chinese Journal of Animal Nutrition 

            doi:10.3969/j.issn.1006-267x.2015.05.001 

            抗茵脂肽Surfactin的抗茵活性及應用 

            翟少偉李劍史慶超 

            (集美大學水產學院,鰻鱺現代產業技術教育部工程研究中心,廈門361021) 

            摘 要:Surfactin是枯草芽孢桿菌屬不同菌株代謝產生的一種抗茵脂肽,不僅能抑制多種革蘭 

            氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌等病原茵,而且還具有抗病毒、抗支原體、抗原蟲等活性,是潛在 

            的抗生素理想替代品之一。本文對抗菌脂肽Surfactin的結構、理化性質、抗菌機制及應用研究 

            進展進行了綜述,為Surfactin的進一步研究和應用提供參考。 

            關鍵詞:抗菌脂肽Surfactin;枯草芽孢桿菌;抗菌機制 

            中圖分類號:¥816.7 文獻標識碼:A 文章編號:1006—267X(2015)05-1333—08 

            抗生素的發現為預防病菌感染、治療動物疾 

            有抗菌作用,而且對病毒、支原體和原蟲等也具有 

            病、促進養殖業的快速發展做出了巨大貢獻。但 

            顯著的抑制效果 。作為一種優良的新型抗菌物 

            濫用抗生素導致越來越多的耐藥菌株的出現和藥 

            質,Surfactin在醫藥、動物養殖、農業生防和食品保 

            物殘留等問題日趨嚴重,對人類和動物的健康構 

            鮮等領域具有廣闊的應用前景。 

            成了嚴重威脅 J。尋找安全環保、無耐藥性、無殘 

            留的抗生素替代品亟待解決。研究發現,由昆蟲、 

            1 Surfactin的結構和理化性質 

            動植物或微生物等基因編碼合成以及人工合成的 

            Surfactin最早由Arima等 于1968年在枯草 

            抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)具有廣譜抗 

            芽抱桿菌(Bacillus subtilis)IFO 3039發酵液中發 

            菌活性,不易產生耐藥性,是潛在的抗生素理想替 

            現。Kakinuma等 之后對Surfactin的分子結構進 

            代品之一 J。但從昆蟲和動植物中提取AMPs 

            行了報道,闡明了Surfactin由1個手性序列為LL- 

            工藝復雜、含量極低使AMPs應用受到了極大的 

            DLLDL的七肽和1個含13到l5個碳原子的 一 

            限制。研究者嘗試通過基因重組表達等方法提高 

            羥基脂肪酸構成。Surfactin長脂肪酸鏈及肽鏈上 

            AMPs產量,但由于AMPs易受蛋白酶的攻擊,且 

            的L一亮氨酸2(L—Leu2)、D一亮氨酸3(D—Leu3)、L一 

            表達產物往往對宿主細胞有毒性而進展緩慢;此 

            纈氨酸 (L—Val )、D一亮氨酸 (D-Leu )、L一亮氨 

            外,人工合成或者重組表達生產的AMPs在應用 

            酸 (L—Leu )構成其親油基團,環鏈骨架與L一谷氨 

            中可能存在安全問題不容忽視 。微生物代謝產 

            酸 (L—Glu )和L一天冬氨酸 (L—Asp )2個酸性氨 

            生的AMPs,如芽孢桿菌脂肽、乳球菌肽、桿菌肽和 

            基酸殘基構成親水基團【lo 3。Bonmatin等_l 運用 

            細菌素等與昆蟲和動植物源AMPs相比,具有高 

            高分辨核磁共振氫譜結合分子動力學技術確定了 

            效抗菌優勢 ,成為近年研究熱點。Surfactin是芽 

            SurNcdn的三維結構。Surfactin在水溶液中呈馬 

            孢桿菌屬不同菌株代謝產生的一種脂肽,是研究 

            鞍型,位于同側的氨基酸殘基L—Leu 和D.Leu 彼 

            較為深入的微生物源AMPs之一 。研究表明, 

            此面對,2個酸性氨基酸L—Glu 和L—Asp 構成了 

            Surfactin具有廣譜高效的抗菌活性,不僅對革蘭氏 

            個較小的極性結構域,具有輕微的親水能力。 

            陽性菌、革蘭氏陰性菌、霉菌等多種細菌或真菌具 

            在另一側,氨基酸殘基D—Leu。、L—Val4和L—Leu 與 

            收稿日期:2014—12—05 

            基金項目:科技部“十二五”農村領域國家科技計劃項目“功能性肽產品的創制與應用”(2013BAD10B03) 

            作者簡介:翟少偉(1973一),男,河北晉州人,副教授,碩士生導師,博士,研究方向為動物營養與飼料資源開發。E.mail:shaoweizhai@163 

            com 

            動物營養學報 

            脂肪酸鏈構成主要的疏水結構域_l 。 

            兩親性化學結構使Surfactin表現出良好的表 

            面活性和穩定性,僅需0.005%或更低濃度的 

            現出良好的抗菌效果。 

            近來研究發現,Surfactin還能有效對抗皰疹病 

            毒(Herpes simplex virus) 、塞姆利基森林病毒 

            (Semliki forest virus) 、豬細小病毒(Porcine P 

            Surfactin ̄p可將雙蒸水的表面張力從72 mN/m降 

            至27 mN/m,其效果甚至優于十二烷基硫酸鈉 。 

            Surfactin的臨界膠束濃度約為1×10一mol/L,遠低 

            arvovirus)、偽狂犬病毒(Pseudorabies virus)、新城 

            疫病毒(Newcastle disease virus) 等多種病毒。 

            此外,Surfactin對衣原體 、雞柔嫩艾美耳球蟲 

            (Eimeria ,zP ) 也具有顯著的抑制作用。綜 

            于許多化學合成的表面活性劑 。枯草芽孢桿菌 

            SCUT09發酵產物中提取的脂肽Surfactin耐鹽度 

            高達21%,121℃高溫處理2 h后的表面活性和乳 

            上所述,Surfacifn具有廣譜高效的抗菌活性,作為 

            化能力仍保持穩定 。Hwang等_l 和孫力軍 

            等 副對Surfacrin的生理毒性研究顯示,Surfactin 

            小鼠口服半致死劑量(LD 。)分別超過2 500和 

            5 000 mg/kg,急性毒性屬實際低毒或無毒級,表 

            明Suffactin具有較高的安全性。其在畜禽及水產 

            動物飼料中的安全劑量尚未見報道,還有待于進 

            步研究。 

            2 Surfactin的抗菌活性 

            研究表明,Surfactin對革蘭氏陽性菌、革蘭氏 

            陰性菌、真菌以及微漿菌等均具有較強的抑制作 

            用。Gomaa【16]研究發現,從地衣芽孢桿菌(Bacil- 

            lus licheniformis)M104中分離出的Surfactin對蠟 

            樣芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)、蘇云金芽孢桿 

            菌(Bacillus thuringiensis)、金黃色葡萄球菌(Staph- 

            ylococcus aureus)以及李斯特菌(Listeria monocyto- 

            genes)等革蘭氏陽性菌和大腸桿菌(Escherichia 

            coli)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、傷寒性 

            沙門氏菌(Salmonella typhimurium)以及變形桿菌 

            (Proteus vulgaris)等革蘭氏陰性菌和酵母菌(Can— 

            dida albicans)均具有明顯的抑菌作用。此外,Sur— 

            factin對哈威式弧菌(Vibro harveyi)、鰻弧菌( 一 

            bro anguillarum) 、溶藻弧菌(Vibrio alginolytic— 

            US) 引、產氣單胞菌(Aeromonas hydrophila) 和 

            核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum) 等常見病原菌 

            都具有溫和的抑制效果。微漿菌能引起許多疾 

            病,在后天免疫缺乏癥候群疾病的過程中扮演著 

            個重要的角色。微漿菌沒有細胞壁,其細胞膜 

            主要由3層脂膜和固醇組成,在哺乳動物細胞培 

            養過程中,細胞遭受到微漿菌感染的同時加入 

            Surfactin,可使受感染的細胞恢復到未感染的細胞 

            形態,并且不會對細胞產生毒性 。Hwang等 

            報道,給感染細菌敗血癥的老鼠注射Surfactin,其 

            血液中的細菌數量約為未注射的老鼠的1/400,表 

            抗菌藥物研究與開發極具潛力。 

            3 Surfactin的抗茵機制 

            目前,Surfactin抗菌的具體機制尚不明確,普 

            遍認為Surfactin的抗菌活性與其理化性質密切相 

            關。很多學者試圖通過提出不同假說,建立相關 

            模型及開展試驗來解釋Surfactin的抗菌作用進 

            程。鑒于Surfactin抗菌過程的復雜性,目前尚不 

            明確其是通過哪一種途徑或者多種途徑共同作用 

            而發揮抗菌效果。 

            3.1 攻擊病原菌細胞膜,造成膜崩解或滲透壓 

            失衡 

            研究表明,Surfactin對病原菌作用的細胞靶位 

            點是細胞膜 。目前,關于Surfactin與微生物的 

            細胞膜之間的作用機制主要有以下2種假說:1) 

            去垢劑假說,Sur ̄cfin將帶負電的肽環伸入水相, 

            將其非極性的脂肪酸鏈插入到細胞膜磷脂分子 

            層,達到一定濃度時,會產生類去垢劑的效應,使 

            細胞膜產生裂縫并分離,胞內物質外泄,最終引起 

            細胞生長受到抑制或死亡 。 。Deleu等 以二 

            油酰基磷脂酰膽堿(dioleoyl phosphatidylcho1ine, 

            DOPC)作為流動相,二油酰基磷脂酰膽堿(di— 

            palmitoyl phosphatidylcholine,DPPC)作為凝膠相 

            模擬細胞膜結構,研究Surfactin對膜脂質相分離 

            作用表明,Surfactin的濃度起著至關重要的影響。 

            當Surfactin的濃度低于臨界微團濃度(CMC)時, 

            Surfactin插入到膜的凝膠相和液體脂質結構域的 

            邊界處,這時Surfactin發揮類似膽固醇的作用,增 

            強各相之間的范德華力,促進液相膜的流動。該 

            階段脂質體大小并沒有受到影響,但膜內的降鈣 

            素會發生釋放。隨著Surfactin濃度的增加,接近 

            至CMC時,DOPC立即發生溶解,由于Surfactin 

            的選擇作用,大部分DOPC分子被Surfactin溶解, 

            并形成混合膠束,而DPPC的結構并不會受到影 

            5期 翟少偉等:抗菌脂肽Surfactin的抗菌活性及應用 

            響。當濃度高于CMC后,Surfactin發揮其明顯的 

            增溶作用,DOPC和DPPC分子都被溶解形成混合 

            膠束,使膜的大小的通透性發生變化。2)孔洞假 

            說,該假說將Surfactin與生物膜作用簡要分為3 

            個過程。。 引:1)Surfactin通過與膜之間的疏水作 

            代謝的關鍵酶之一。脂肽對酶活性得不同程度的 

            影響表明其能夠通過影響酶的活性來改變細胞的 

            代謝。此外,脂肽還能夠抑制點青霉對糖類及蛋 

            白質利用,導致點青霉生長受阻 姐 。 

            用力插入膜表面;2)由于Surfactin帶負電荷的氨 

            基酸和脂質頭部產生電荷相互排斥,造成膜彎曲; 

            3)膜體極不穩定而產生類似膠束的結構造成膜崩 

            解。添加低濃度的Surfactin時其會和微漿菌的細 

            4 Surfactin應用的研究進展 

            4.1 醫藥領域中的應用 

            抗生素的濫用導致細菌耐藥性問題的出現已 

            經逐漸成為醫學界迫在眉睫的難題,可代替抗生 

            胞膜結合,造成膜上孔洞的發生進而造成膜內外 

            滲透壓失衡使細菌死亡,而添加高濃度的Surfactin 

            則會導致微漿菌整個細胞膜瓦解。。 。然而相同濃 

            度的Surfactin并不會對哺乳動物細胞造成影響, 

            其原因可能是微漿菌細胞膜上的膽固醇含量比哺 

            乳動物細胞高20%~30%,而且微漿菌細胞膜上磷 

            脂酰膽堿、磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺等磷脂質 

            的比例也較高。高比例的膽固醇及磷脂質可能導 

            致其對于Surfactin的感受性高于哺乳動物細胞, 

            從而Surfactin能選擇性的作用于微漿菌的細 

            胞膜 。 。 

            3.2抑制蛋白質合成。干擾病原菌繁殖 

            Brogden_3刮和Gueguen等_3 認為脂肽可與病 

            原菌染色體DNA發生相互作用,導致DNA的復 

            制、轉錄、表達功能受抑制,影響細菌蛋白質的合 

            成,進而導致病原菌繁殖受阻。但研究納豆菌脂 

            肽(活性成分為Surfactin、Imrin和Fengycin)對金 

            黃色葡萄球菌 和副溶血弧菌(Vibrio parahemo— 

            lyticus) 抑菌試驗發現,抗菌脂肽雖然能與金黃 

            色葡萄球菌和副溶血弧菌的DNA體外結合,使 

            DNA最大吸收峰發生了輕微的藍移,并產生增色 

            效應,但納豆菌脂肽并不能抑制所有蛋白質的合 

            成,而納豆菌脂肽進入細胞后,能否到達細胞核和 

            細菌染色體DNA發生作用,還需進一步研究。 

            3.3抑制酶的活性。影響細胞正常代謝 

            Huang等 。“研究發現,枯草芽孢桿菌fmbJ所 

            產脂肽(活性成分Surfactin和Iturin)可抑制點青 

            霉(Penicillium notatum)菌絲體細胞內琥珀酸脫氫 

            酶(succinate dehydrogenase,SDH)和蘋果酸脫氫 

            酶(malate dehydrogenase,MDH)活性,并且隨著脂 

            肽濃度的增加對酶活性的抑制作用逐漸增強。 

            SDH參與細胞的能量代謝,是連接氧化磷酸化與 

            電子傳遞的樞紐之一。MDH可以催化蘋果酸與 

            草酰乙酸間的可逆轉換,是參與細胞的生物合成 

            素的新藥物的開發勢在必行 。Surfactin特殊的 

            兩親型結構,能夠與細菌細胞膜結合并將其非極 

            性端插入到細胞膜的疏水孔中,破壞細胞的完整 

            性,干擾細胞正常代謝從而起到抑菌作用 。研 

            究表明,Surfactin在臨床上能有效對抗糞產堿菌 

            (Alcaligenesfaecalis)、變形桿菌、綠膿桿菌、大腸桿 

            菌和金黃色葡萄球菌等耐藥菌 ;Surfactin可抑 

            制鼠細胞脂多糖(1ipopolysaccharides,LPS)介導生 

            成的炎癥介質,如腫瘤壞死因子o【(TNF—o【)、白細 

            胞介素1(IL一1)、白細胞介素6(IL一6)和一氧化氮 

            合酶,減緩由LPS引起的真核細胞感染 。近年 

            來,Surfactin在抗病毒制劑 、抗腫瘤制劑 、溶 

            血栓制劑 、口服免疫佐劑 、乙肝疫苗 以及 

            糖尿病治療 。。等方面中的應用研究也取得了突 

            破,Surfactin在醫藥領域中扮演著越來越重要的 

            角色。 

            4.2動物養殖中的應用 

            抗生素類促生長添加劑在動物養殖過程中長 

            期使用會導致其耐藥性、藥物殘留和環境污染等 

            問題,探尋新型抗菌藥物越來越受到重視。Sur— 

            factin具有獨特殺菌機制和抗菌廣譜性,且病原菌 

            不易對Surfactin產生耐藥性,正逐漸進入人們的 

            視野。一方面,Surfactin具有較好的熱穩定性和化 

            學穩定性,不僅在加工過程中能有效防治病原菌 

            對原料的感染,而且能保證其經過加工之后,仍然 

            保持較高的抗菌活性;另一方面,Surfactin分子質 

            量較小,經動物食用后進人腸道可以有效抑制體 

            內病原微生物的生長繁殖,調節腸道菌群平衡,并 

            不易產生耐藥性和殘留 。近年來,關于Surfac. 

            tin在動物養殖中應用的報道日益增多。由于抗菌 

            脂肽Surfactin可導致嗜水氣單胞菌細胞膜通透性 

            增加,使細胞內一些離子以及大分子的蛋白質和 

            核酸泄漏到細胞外,從而引起細胞的死亡,其被認 

            為可用于嗜水氣單胞菌感染引起的水生動物疾病 

            1336 動物營養學報 

            預防和控制 。研究表明,點帶石斑魚(Epineph. 

            elus coioides)飼料中添加20 mg/kg Surfactin可增 

            4.4食品加工和保鮮中的應用 

            食品加工過程中,Surfactin可促進脂肪乳化, 

            強魚體免疫力以對抗溶藻弧菌等病原菌的感 

            染 ;誘導石斑魚AMPs、干擾素誘導蛋白和黏病 

            毒抗性蛋白等先天型免疫基因的表達,顯著提高 

            增重率;降低感染神經壞死病毒(Necrosis cirus)和 

            虹彩病毒(Irido virus)石斑魚的死亡率 。史慶 

            控制脂肪聚集,有利于食品的加工,并保持食品的 

            質地和口感 。Surfactin的抗菌活性能有效控制 

            食品中有害微生物的滋生,可作為生物防腐劑應 

            用在食品防腐保鮮領域 。研究表明,Surfactin 

            可有效抑制乳中大腸桿菌0157,延長乳保質 

            期 ;納豆菌抗菌肽APNT一6(活性成分為Surfac— 

            tin、Fengycin和Imrin)可減緩凡納濱對蝦貯藏過程 

            超等 在吉富羅非魚飼料中添加12.5 mg/kg的 

            抗菌脂肽Surfactin即可顯著提高增重率、腸道脂 

            肪酶和蛋白酶的活性。石廣舉等 發現,在凡納 

            濱對蝦飼料中添加100 mg/kg NT一6抗菌脂肽(活 

            性成分為Surfactin、Fengycin和Imrin同系物)可抑 

            制水體和蝦體中弧菌的生長,提高對蝦增重率和 

            特定生長率。飼料中添加4 000 U/kg抗菌脂肽 

            (活性成分為Surfactin、Fengycin及其同系物),可 

            對艾拔益加(AA)肉雞的生長發育和免疫機能具 

            有較好的調節和促進作用 ,還能提高抗氧化機 

            能和促進蛋白質的代謝 ;提高斷奶仔豬生長性 

            能,抑制仔豬斷奶應激造成的腹瀉和腸道有害微 

            生物,但對有益微生物也有一定的抑制作用,有效 

            調節血液激素水平和某些生化指標,提高機體對 

            脂類的轉化利用能力和蛋白質的沉積能力 。研 

            究表明,斷奶仔豬飼料中添加150 mg/kg抗菌脂 

            肽替代75 mg/kg金霉素,可促進采食,提高日增 

            重,顯著改善飼料報酬,并顯著降低腹瀉率[5 ; 

            Surfactin與枯草芽孢桿菌聯用也可以促進斷奶仔 

            豬腸道內有益菌增殖,改善腸道微生態環境,提高 

            機體全身的免疫應答反應 。隨著更多關于Sur— 

            factin在動物飼料中應用的研究,Surfactin有望成 

            為新型綠色抑菌促生長飼料添加劑在動物養殖中 

            廣泛應用。 

            4.3農業生物防治中的應用 

            研究表明,Surfactin對豆科作物灰霉病 、水 

            稻細菌性條斑病 ¨、黃瓜枯萎病 和生菜霜霉 

            病_6。。等具有顯著的防治效果。Waewthongrak 

            等 刮還發現,枯草芽孢桿菌ABS-S14發酵粗提物 

            (活性成分為Surfactin、Iturin A和Fengycin)可誘 

            導植物過氧化物酶和L一苯丙氨酸解氨酶等抗病有 

            關酶的活性的增強,強烈抑制綠霉菌(Penicilium 

            digitatum)Sacc的生長,降低柑桔類水果患病率。 

            Surfactin還可替代化學表面活性劑,作為分散劑、 

            農藥助劑提高化肥和農藥的使用效率 J。 

            中pH、揮發性鹽基氮和細菌總數增加,延長2~3 d 

            貨架期 ,Surfactin還能減緩肉制品儲藏過程中 

            pH的上升,防止脂肪氧化,對肉制品儲藏起到良 

            好的保鮮效果 。 

            4.5其他領域中的應用 

            Surfactin優良的表面性能使其在原油采收、環 

            境修復和化妝品等領域的應用也頗具優勢。A1一 

            Wahaibi等。。 報道由枯草芽孢桿菌B30產Surfac— 

            tin能分別提高17%一26%輕質油采收率和3l%稠 

            油采收率。石油開采、運輸、加工及儲存過程中, 

            難以避免地會排人環境對土壤、水體造成污染。 

            加入生物表面活性劑乳化烴類和水的混合液,增 

            加烴類的降解是目前治理油污的有效方法之一。 

            Singh等¨ 以Surfactin為主要成分的脂肽生物表 

            面活性劑洗滌含有石油烴的土壤,去除率達 

            64.5%。通過利用Surfactin對重金屬離子的絡合 

            作用,提高驅除土壤中重金屬的效率成為環境保 

            護研究中的熱點之一 J。此外,Surfactin可以 

            改善化妝品的水洗性能,增加皮膚的光潤和滑嫩 

            性 ,在化妝品領域中應用也極具吸引力。 

            5小結與展望 

            Surfactin優良的抗菌活性和特殊的抗菌機制 

            使其有望成為抗生素潛在替代品之一,在醫藥、動 

            物養殖、農業生物防治以及食品加工和保鮮等領 

            域具有巨大的應用價值。但目前Surfactin在生產 

            實踐中廣泛應用仍然面臨著一些挑戰:1)Surfactin 

            的抗菌機制尚不明確,關于Surfactin作用機制的 

            研究多為體外模型模擬,而對Surfacfin在生物體 

            內作用研究甚少;2)Surfactin發酵生產產量一般較 

            低,受其特殊的兩親性質的影響,Surfactin分離提 

            純成本較高,大規模商品化生產至今還未實現,極 

            大限制了Surfactin的應用。因此,通過改良生產 

            菌株、改善發酵生產工藝和選擇適合的廉價的發 

            5期 翟少偉等:抗菌脂肽Surfactin的抗菌活性及應用 1337 

            酵底物等途徑提高Surfactin產量仍將是今后科研 

            人員重點研究課題之一;3)Surfactin在不同領域中 

            適宜的添加劑量有待研究,雖然毒理試驗證明 

            Surfactin的急性毒性屬實際低毒或無毒級,但過高 

            脅[J].Agricultural and Biological Chemistry,1969, 

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            lipopeptide studied by H—nmr,distance geometry,and 

            的濃度可能誘發細胞溶血,對細胞產生毒性仍然 

            令人擔憂。因此,Surfactin安全有效的用量還需進 

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            突破性進展。 

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            Antimicrobiai Lipopeptide Surfactin:Antimicrobial 

            Activity and Applications 

            ZHAI Shaowei LI Jian SHI Qingchao 

            (Fisheries College,Engineering Research Centre of Eel Modern Technical Industry of Ministry f o

            Education,Jirnei University,Xiamen 361021,China) 

            Abstract:Surfactin is an antimicrobial lipopeptide produced by various strains of the Bacillus subtilis.In addi— 

            tion to the broad—spectrum antimicrobial activiies against Gram—posittive bacteria,Gram—negative bacteria and 

            fungi,it also has multiple biological activities including antiviral,anti—mycoplasma and antiprotozoal activities. 

            Surfactin may be one of the promising alternatives to antibiotics.In this paper,the research advances in chemi— 

            cal structure,physical characters,antimicrobial properties and applications of Surfactin were reviewed to pro— 

            vide reference for the furhert research and application.[Chinese Journal of Animal Nutrition,2015,27(5): 

            1333.1340] 

            Key words:antimicrobial lipopeptide surfactin;Bacillus subtilis;antimicrobial mechanism 

            Author,ZHAI Shaowei,associate professor,E—mail:shaoweizhai@163.coin (責任編輯王智航) 

            抗菌脂肽Surfactin的抗菌活性及應用

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            標簽:抗菌   研究   細胞   脂肽   應用
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