硫酸銨鹽沉淀法和乙酸沉淀法沉淀乳清蛋白結(jié)果的影響因素

2024年3月15日發(fā)(作者：500字寫景作文)

硫酸銨鹽沉淀法和乙酸沉淀法沉淀乳清蛋白結(jié)果的影響因素

1、蛋白自身性質(zhì)

如膜蛋白及一些疏水性高的蛋白就很容易發(fā)生疏水聚合而沉淀，做過膜蛋白提取以及

包涵體溶解時都有切身體會。在表達(dá)還有二硫鍵鍵的蛋白時特別容易形成包涵體蛋白，所

以蛋白的氨基酸序列中，含硫氨基酸較多時也容易形成沉淀。

2、pH值

蛋白質(zhì)大多數(shù)都在高pH時溶解性高，低pH時易沉淀，這可能與氫鍵的形成有關(guān)。

但有時候更低pH時蛋白又溶解了，這一現(xiàn)象在我們用親和層析純化抗體時特別常見。鹽

濃度就是鹽析效應(yīng)，高濃度的鹽破壞蛋白的水化層，使得蛋白質(zhì)聚集沉淀，常用的就是硫

酸銨沉淀。鹽析沉淀通常對蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)沒有破壞，再溶時活性可以完全恢復(fù)。常見

的例子就是硫酸銨沉淀純化IgG。同樣，硫酸銨沉淀也常碰到不可逆的情況，例如大腸桿

菌(Escherichiacoli)表達(dá)的重組蛋白往往在硫酸銨沉淀后再溶困難。

3、有機(jī)溶劑

例如丙酮沉淀，但有機(jī)溶劑也不是全部對蛋白起沉淀作用，有時候也有助溶作用。例

如有些膜蛋白的有機(jī)溶劑抽提。

4、溫度

高溫或低溫都有可能使得蛋白質(zhì)沉淀。煮沸沉淀常見了，低溫沉淀的例子有血液制品

的冷乙醇沉淀。

5、表面活性劑

對蛋白質(zhì)有助溶作用。例如做電泳的SDS就是很強(qiáng)的表面活性劑，還有TWEEN，Triton

等等。

6、還原劑

還原劑往往對蛋白質(zhì)有助溶作用。有些蛋白當(dāng)加入的還原劑在空氣中慢慢氧化后，就

會沉淀析出。變性劑如尿素、鹽酸胍，包涵體蛋白在用變性劑溶解后，再去除變性劑經(jīng)常

會沉淀析出。