固液分離和硫酸銨分級(jí)沉淀純化藻藍(lán)蛋白

2024年3月15日發(fā)(作者：艾維維)

固液分離和硫酸銨分級(jí)沉淀純化藻藍(lán)蛋白

一、目的

1掌握提取液的固液分離方法。

2掌握硫酸銨分級(jí)沉淀藻藍(lán)蛋白的原理和方法。

3熟練硫酸銨分級(jí)沉淀蛋白技術(shù)。

二、原理

硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質(zhì)。用此方法可以

將提取液中的藻藍(lán)蛋白和雜蛋白分離。高濃度的鹽離子在蛋白質(zhì)溶液中一方面可

與蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)水分子，從而破壞蛋白質(zhì)表面的水化膜，降低其溶解度，另外可以

中和蛋白質(zhì)表面所帶電荷，降低蛋白質(zhì)之間的靜電排斥，使之從溶液中沉淀出來。

各種蛋白質(zhì)的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液來沉淀不同的蛋白質(zhì)。

這種方法稱之為鹽析。采用硫酸銨分級(jí)沉淀可以分別沉淀雜蛋白和藻藍(lán)蛋白，實(shí)

現(xiàn)藻藍(lán)蛋白的純化。

三、實(shí)驗(yàn)器材及試劑

1實(shí)驗(yàn)儀器及工具：

機(jī)械攪拌器、冰箱、電子天平、酸度計(jì)、漏斗、離心機(jī)、三角瓶、燒杯、移

液槍等。

2實(shí)驗(yàn)原料及試劑

硫酸銨、稀酸、稀堿等。

四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟

1、樣品準(zhǔn)備：打開低溫離心機(jī)預(yù)冷30分鐘，將藻藍(lán)蛋白提取液分裝至50毫升

離心管中，每管裝液量約為30～40毫升，不能超過40毫升，每管都要用天平進(jìn)

行稱重平衡。

2、固液分離：將平衡好的離心管對(duì)稱放置，裝樣品不能對(duì)稱時(shí)，可以用離心管

裝水對(duì)稱，蓋好蓋子后開始離心，離心過程中必須有專人看管，離心結(jié)束后必須

等到轉(zhuǎn)速降為0才能打開離心機(jī)。

3、藻藍(lán)蛋白提取液體積量取：用量筒量取上清液體積并記錄，然后將藻藍(lán)蛋白

提取液分為設(shè)定份數(shù)，記錄體積（留取1份放至冰箱冷藏）。

4、硫酸銨分級(jí)沉淀：根據(jù)藻藍(lán)蛋白提取計(jì)算出10%、20%、30%、40%、50%、

60%、70%飽和度所需的硫酸銨，分別加入到上述藻藍(lán)蛋白溶液中，機(jī)械攪拌均

勻后放在4℃靜置過夜分級(jí)沉淀。

5、沉淀蛋白量測(cè)定：將沉淀蛋白固液分離后稱取濕重，記錄濕重。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄

藻藍(lán)蛋白提取液體積記

錄

藻藍(lán)蛋白溶液顏色觀察、

記錄

沉淀蛋白顏色記錄

沉淀上清液顏色記錄

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析