HPLC法同時測定辣椒面中堿性橙2,21,22和酸性橙II的含量

HPLC法同時測定辣椒面中堿性橙2,21,22和酸性橙II的含

量

楊園園;許乾麗;黎殊

【摘 要】建立辣椒面中堿性橙2,21,22和酸性橙II的高效液相色譜(HPLC)同時測

定的方法.樣品經70％乙腈超聲提取后離心,采用C18色譜柱分離,以乙腈和10

mmol/L乙酸銨水溶液(乙酸0.12％)為流動相進行梯度洗脫,流速為1.0 mL/min,

紫外檢測器進行檢測.結果表明:堿性橙2,21,22在1～9μg/mL和酸性橙II在0.1～

0.9μg/mL濃度范圍內呈現良好的線性關系,樣品在添加水平為0.1～0.6 mg/kg時,

平均回收率為91％～107％,相對標準偏差(RSD)為1.1％～7.8％.該方法具有操作

簡單、重復性好和準確度高等優點,適用于辣椒面中堿性橙2,21,22和酸性橙II的

測定.%A method is developed for the determination of basic orange

2,21,22 and acid orange II levels in chili power by high performance liquid

chromatography(HPLC).The samples are extracted with 70％

acetonitrile,and then parated on a C18 column,and detected by HPLC-

photodiode array detector, with acetonitrile and 10 mmol/L ammonium

acetate solution (0.12％ acetic acid)as a mobile pha, the flow rate is 1.0

mL/ results show that a good linear relation with the basic orange

2,21, 22 in the concentration range of 1～9μg/mL and the acid orange II in

the concentration range of 0.1～0.9μg/mL is average

recoveries are 91％～107％,with the relative standard deviation (RSD)of

1.1％～7.8％ under the addition level of 0.1～0.6 mg/ method has

the advantages of simple operation,good repeatability and high

accuracy,and can be applied to the detection and analysis of basic orange

2,21,22 and acid orange II levels in chili powder.

【期刊名稱】《中國調味品》

【年(卷),期】2018(043)006

【總頁數】3頁(P165-167)

【關鍵詞】辣椒面;HPLC;堿性橙2;堿性橙21;堿性橙22;酸性橙II

【作 者】楊園園;許乾麗;黎殊

【作者單位】貴州省食品檢驗檢測所,貴陽 550001;貴州省食品檢驗檢測所,貴陽

550001;貴州省食品檢驗檢測所,貴陽 550001

【正文語種】中 文

【中圖分類】TS207.3

辣椒面作為貴州具有特色的辣椒制品，深受消費者喜愛。近年來，因違法添加染料

等非食用物質而導致的食品安全事故時有報道。衛生部在2008年以來就陸續發布

了5批《食品中可能違法添加的非食用物質名單和易濫用的食品添加劑名單》,其

中就包括堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22和酸性橙II等非食用物質，這4種屬

于染料，由于其著色穩定、價格低廉，被一些商家非法添加到辣椒面中以改善色澤。

但長期接觸這些染料可能會致癌，因此嚴禁將此使用于食品中。為此，建立簡單、

快速、準確的檢測方法變得尤其重要。通過文獻報道，染料類物質的檢測方法主要

有高效液相色譜法[1-5]、高效液相色譜-質譜法[6]等，目前關于同時測定辣椒面中

堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22和酸性橙II的國標方法未見報道。本實驗通過

提取、離心、測試，建立了辣椒面中堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22和酸性橙II

的HPLC測定方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器

戴安Ultimate 3000高效液相色譜儀；Chromeleon 7.0工作站 美國Thermo

Fisher公司；電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司；離心機 長沙平凡儀器儀表

有限公司；XW-80A渦旋振蕩器 海門市其林貝爾儀器制造有限公司。

1.2 材料

堿性橙2對照品(批號：6A15G020， 98%)；堿性橙21對照品(批號：4A14K050，

100%)；堿性橙22對照品(批號：6A16G050，100%)；酸性橙II對照品(批號：

C1573500，德國torfer，96.3%)；乙腈(色譜純，默克公司)；乙酸銨、

乙酸(分析純，成都市科龍化工試劑廠)；辣椒面樣品(貴州省食品藥品監督管理局

稽查部門抽樣提供)。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的配制

分別精密稱取堿性橙2 對照品0.01096 g、堿性橙21對照品0.01071 g、堿性橙

22對照品0.01036 g、酸性橙II對照品0.01012 g，置于100 mL量瓶中，加少

量水溶解，再加50%甲醇至刻度，得到4種對照品儲備液，濃度分別為107.41，

107.1，103.6，97.456 μg/mL。

吸取酸性橙II儲備液10 mL于100 mL量瓶中，加水至刻度搖勻，制得溶液濃度

為9.7456 μg/mL。

加標實驗所需的標準溶液：分別吸取堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22儲備液各

1.00 mL，酸性橙II儲備液0.5 mL于25 mL容量瓶中，加水至刻度搖勻，制得堿

性橙2、堿性橙21、堿性橙22和酸性橙II溶液濃度分別為4.296，4.284，

4.144，1.949 μg/mL。

2.2 樣品溶液的制備

準確稱取5 g樣品于50 mL塑料離心管中，加入10 mL 70%乙腈水溶液，超聲提

取20 min后，以4000 r/min離心10 min，取20 μL液相色譜測定。

2.3 色譜條件

2.3.1 色譜柱

Capcell PAK C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)。

2.3.2 流動相

A:乙腈；B：10 mmol/L 乙酸銨水溶液(乙酸0.12%)0 min→14 min(A：

30%→82%)；14 min→15 min(A：82%→82%)；15 min→16 min(A：

82%→30%)。

2.3.3 檢測波長

酸性橙II和堿性橙2為450 nm；堿性橙21和堿性橙22為485 nm；柱溫：

35 ℃；流速：1.0 mL/min。分別吸取標準溶液和樣品加標溶液注入色譜儀，其色

譜圖見圖1。

圖1 A：混合標準溶液色譜圖；B:加標樣品溶液色譜圖Fig.1 A:The

chromatogram of mixed standard solution; B:The chromatogram of spiked

sample solution

2.4 方法學考察

2.4.1 堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的線性關系考察

分別精密吸取堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II每種各1，3，5，7，9

mL于100 mL容量瓶中，制備成混合標準溶液。注入液相色譜儀，進樣體積為

20 μL，記錄峰面積A，以峰面積A對濃度C(μg/mL)進行線性回歸計算，結果見

表1。

表1 堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的回歸方程、線性方程和線性范

圍Table 1 The regression equation, linear equation and linear range of

basic orange 2, basic orange 21, basic orange 22 and acid orange II化合物

相關系數(R)線性方程線性范圍(μg/mL)檢測波長(nm)檢出限(mg/kg)堿性橙

20.9996y=1.0469x-0.514161.074～9.6654500.02堿性橙

210.9998y=1.4192x-0.671921.071～9.6404850.02堿性橙

220.9995y=2.314x-1.87481.036～9.3254850.02酸性橙II0.9998y=1.0876x-

0.061330.0974～0.8774500.02

2.4.2 精密度測試

取標準曲線第二點，即堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22標準溶液濃度為3

μg/mL，酸性橙II為0.3 μg/mL，連續進樣6次，每次20 μL，測得堿性橙2、

堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II峰面積的RSD分別為0.5%，1.0%，0.8%，

1.6%。結果表明：本實驗所用儀器精密度良好。

2.4.3 回收率測試

準確稱取5 g樣品(精確至0.01 g)，共9份，置于50 mL塑料離心管中，加入標

準溶液(堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22濃度分別為4.296，4.284，4.144

μg/mL)各0.25，0.5，0.75 mL，1.949 μg/mL酸性橙II各加入 0.3，1.0，1.5

mL，按2.2項下制備加標樣品溶液，取20 μL樣品溶液注入液相色譜儀測定,結果

見表2。

表2 回收率和RSD結果表Table 2 The results of recoveries and RSDs參數名

稱背景值(mg/kg)添加量(mg/kg)檢測值(mg/kg)平均回收率

(%)RSD(%)0.2150.195917.8堿性橙

2<0.020.4300.404942.20.6440.601933.30.2140.2181025.4堿性橙

21<0.020.4280.411961.50.6430.611953.10.2070.2211074.2堿性橙

22<0.020.4140.397962.60.6220.603971.80.1170.1191021.4酸性橙

II<0.020.3900.359921.10.5850.550941.5

由表2可知，加標含量在0.1～0.6 mg/kg之間，回收率在91%～107%之間，

RSD在1.1%～7.8%之間，符合食品理化檢測(GB/T 27404-2008《實驗室質量控

制規范 食品理化檢測》的要求。

2.4.4 檢出限測試

準確稱取5.00 g樣品(精確至0.01 g)，置于50 mL塑料離心管中，加入經稀釋的

標準溶液(堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的濃度分別為0.2148，

0.2142，0.2072，0.1949 μg/mL)0.5，1.0，1.5 mL，按2.2項下制備樣品溶液。

取20 μL樣品溶液注入液相色譜儀測定。記錄保留時間和峰面積，當峰面積與基

線噪聲比值(S/N)為3時，以此時所加標的量來計算實際檢出限。測得當堿性橙2、

堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的加標濃度分別為0.1074，0.1071，0.1036，

0.09745 μg/mL時，S/N為3，當稱樣量為5 g時，堿性橙2、堿性橙21、堿性

橙22、酸性橙II的實際檢出限為0.2 mg/kg。

3 討論

最近2年，在進行國家監督抽檢和省級監督抽檢的辣椒面樣品中，偶有發現添加

非食用物質的情況，尤其是違法添加工業染料酸性橙、堿性橙等，本實驗室以辣椒

面為基質，探索同時檢測堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的高效液相

色譜法。該方法處理簡單、快速，重復性和準確度可靠，可用于辣椒面中堿性橙2、

堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的含量測定，為監控辣椒面的質量提供可靠、快

速的依據。

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