錢(qián)德明

第九批絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的建立

816中國(guó)藥事2007年第21卷第1O羽毛球的英語(yǔ) 期

第九批絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的建立

錢(qián)德明,劉群麗,張媛,邵燕,楊贅昀,孫圓媛,華曉東,張?jiān)铝?

芮菁,朱社敏.,匡榮.(中國(guó)藥品生物制品檢定所,北京100050;北京市藥品檢驗(yàn)

所;天津市藥品檢驗(yàn)所;.浙江省藥品檢驗(yàn)所)

摘要:制備,標(biāo)定第九批絨促性素(HumanChorionicGondotrophin,HCG)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品.

以第四批絨

促性素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品(NIBSCCode:75/589)為標(biāo)準(zhǔn),全國(guó)有4個(gè)實(shí)驗(yàn)室參加,用幼齡小

鼠子宮增重法進(jìn)

行協(xié)作標(biāo)定.采用4個(gè)實(shí)驗(yàn)室共18個(gè)標(biāo)定結(jié)果,經(jīng)合并計(jì)算,測(cè)得本批待標(biāo)品每支

含生物效價(jià)為6O個(gè)國(guó)

際單位.本批待標(biāo)品可以作為絨促性素第九批國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品使用,其批號(hào)為150513

—200409.2007年6月份

正式分發(fā)使用.

關(guān)鍵詞:絨促性素;標(biāo)準(zhǔn)品;生物效價(jià)

中圖分類(lèi)號(hào):R977.1+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1002—7777(2007)10—0816—03

Establishthe9thNationalStandardforHumanChorionicGonadotrophin

QianDeming,LiuQunli,ZhengYuan,ShaoYan,YangBinyun,SunYuanyuan,HuaXiaodon

g2,

ZhangYuelingz,RuiJing,ZhuShemin.,KuangRonga(NationalInstitutefortheControlof

Pharmaceutica1andBiologica1Products,Beijing100050;BeijingInstituteforDrugContro

l;

TianjinInstituteforDrugControl;.ZhejiangInstituteforDrugContro1)

A基因克隆技術(shù) BSTRACTTopreparedanddeterminethe9thnationa1standardofHumanChorionicGona

dotroDhin

(H0G).Determinethe9th六年級(jí)語(yǔ)文試卷分析 nationa1standardofHCGbyyoungfemalemiceuterusweightassa

y,which

regardedthe4ththeinternationa1standardofHCG(NIBSCCode:75/589).Thepotenciesoft

he9th

ascombinativecalculated18res

ultsfrom4

9thnationa1standardofHCGwastablishedsuccessfully,who1Otwas

150513—

200409,andwasdistributedinJune2007.

KEYWoRDSHumanChorionicGonadotrophin(HCG);standard;potency

絨促性素可提取于孕婦尿液,胎盤(pán)等_l1≈],是

胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種促性腺激素,具有促黃

體生成素(L讀書(shū)筆記100字 H)活性,而促卵泡成熟素(FSH)樣作

用甚微,可促使雌性卵泡成熟及排卵,并使破裂卵

泡轉(zhuǎn)為黃體,促使其分泌孕激素.對(duì)雄性則具有促

間質(zhì)細(xì)胞激素(ICSH)作用,能促進(jìn)曲細(xì)精管功能,

特別是睪丸間質(zhì)細(xì)胞的活性,使其產(chǎn)生雄激素,促

使性器官和副性征發(fā)育,成熟,促使睪丸下降和精

子生成.臨床常用來(lái)治療性功能障礙,不孕癥,先

兆流產(chǎn)或習(xí)慣性流產(chǎn),功能性子宮出血,閉經(jīng),隱

睪癥,男性性腺機(jī)能減退癥,精子過(guò)少等.

絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品是該產(chǎn)品生產(chǎn)中進(jìn)行生物

效價(jià)測(cè)定的重要標(biāo)準(zhǔn),該標(biāo)準(zhǔn)品自1960年以來(lái)已

經(jīng)延續(xù)了8個(gè)批次,1988年制備的第八批絨促性

素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)已用完,為了檢驗(yàn)的需要,使本品

種的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品得以延續(xù),特制備和標(biāo)定第九批絨

促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品.同時(shí)也考察了第八批長(zhǎng)期保存

的穩(wěn)定性.現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下.

1材料

絨促性素(HumanChorionicGonadotrophin):

原料由上海麗珠制藥有限公司提供,批號(hào):

030703,生物效價(jià):4074IU?mg-(按干燥品計(jì)

算);人血白蛋白:批去俄羅斯旅游 號(hào):20010909,中泰藥業(yè)有

限公司產(chǎn)品;乳糖:藥用規(guī)格,上海麗珠制藥有限

公司提供;第四批絨促性素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品,批號(hào):

75/589,每支650IU;第八批絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

品,批號(hào):513—8808,每支57IU;第九批絨促性

素國(guó)家待標(biāo)品(估計(jì)效價(jià)每支56IU)的組分和制

中國(guó)藥事2007年第21卷第10期817

備:絨促性素原料126.8mg,乳糖83g,259/5人血

白蛋白100mL,lmol?L醋酸83mI,蒸溜水

加至8300mI,充分混勻后,測(cè)得pH值3.8.溶

液經(jīng)0.45#m濾膜抽濾.濾液分裝到2mL的安瓿

中,每支裝量0.8mL(機(jī)器灌裝),分裝完畢進(jìn)入

凍干機(jī)進(jìn)行凍干(48小時(shí)),然后出箱封口.

動(dòng)物:SPF級(jí)KM小鼠,雌性,體重10～

13g,日齡15～16天,由中國(guó)藥品生物制品檢定所

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種子中心提供,動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):

SCXK(京)2005—0004.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):

SYXK(京)2006—0004.飼料合格證號(hào):SCXK

(京)2005—0007,(北京科奧協(xié)力飼料有限公司).

北京市藥檢所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:清潔級(jí)ICR雌性小鼠,

體重9~12g,合格證號(hào):SCXK(京)2002—0003,

由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供.天津

市藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SPF級(jí)雌性ICR小鼠,

體重11～13g,合格證號(hào):SCXK(京)2002—

0003,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提

供.浙江省藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:清潔級(jí)ICR雌

性小鼠,體重10～13g,合格證號(hào):SYXK(浙)

2005—0057,由浙江省動(dòng)物中心提供,清潔級(jí)KM

雌陛小鼠,體重9～12青銅角 ,合格證號(hào):SCXK(浙)

2004—0012,由浙江省藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房提供.

2方法E43與結(jié)果

2.1效價(jià)測(cè)定結(jié)果

每次實(shí)驗(yàn)取上述小鼠190只,按體重隨機(jī)均勻

分成12組,每組15只,剩余動(dòng)物為空白對(duì)照組.

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為33法,分別取1支絨促性素國(guó)際標(biāo)

準(zhǔn)品,1支s8國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品,2支待標(biāo)品(設(shè)T1和

T2).實(shí)驗(yàn)當(dāng)日先用0.9氯化鈉注射液將每個(gè)制

品溶解稀釋成10IU?mL的溶液,再取一定量的

10IU?mI稀釋液,用0.5羧甲基纖維素鈉溶

液分別稀釋成高,中,低3種濃度的溶液(標(biāo)準(zhǔn)品

和待標(biāo)品溶液濃度相同,濃度為0.20,0.12,

0.07IU?mL,劑距為1獅子資料 :0.6),于每日同一時(shí)

間經(jīng)背部皮下注射給予各組動(dòng)物對(duì)應(yīng)濃度的待標(biāo)品

或標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.2mL,連續(xù)3日,空白對(duì)照組給

相同體積的0.59/6羧甲基纖維素鈉溶液.最后一次

給藥24小時(shí)后,按給藥順序?qū)?dòng)物處死,稱(chēng)體重

后解剖,摘取子宮,剝離附著的組織,用濾紙吸干

子宮外液,立即稱(chēng)重(精度0.1mg).采用沈連忠

等編制的BS2000生物統(tǒng)計(jì)軟件中量反應(yīng)平行線(xiàn)測(cè)

定隨機(jī)設(shè)計(jì)法計(jì)算生物效價(jià)及實(shí)驗(yàn)誤差.可靠性測(cè)

驗(yàn)應(yīng)通過(guò),可信限率不得大于259/6,實(shí)驗(yàn)結(jié)果成

立【_5].用第四批絨促性素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn),測(cè)得

待標(biāo)品8個(gè)實(shí)驗(yàn)成立的結(jié)果,合并計(jì)算生物效價(jià)每

支為59.980IU,可信限率為6.0018;測(cè)得S8

絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品3個(gè)實(shí)驗(yàn)成立的結(jié)果,合并計(jì)

算生物效價(jià)每支為6O.000IU,可信限率為

10.4800;用S8絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn),測(cè)

得待標(biāo)品8個(gè)實(shí)驗(yàn)成立的結(jié)果,合并計(jì)算生物效價(jià)

每支為56.090IU,可信限率為6.3156.

另外,本批標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)定邀請(qǐng)了北京市,天津

市藥品檢驗(yàn)所和浙江省藥品檢驗(yàn)所藥理室參加,標(biāo)

定結(jié)果分別為:用第四批絨促性素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)

準(zhǔn),測(cè)得待標(biāo)品分別有4,2,4個(gè)實(shí)驗(yàn)成立的結(jié)果

(北京,天津和浙江所),合并計(jì)算生物效價(jià)每支為

55.255IU,59.247工作進(jìn)度 IU,68.352IU,可信限率為

5.15729/6,15.8850,7.0424;測(cè)得S8絨促性

素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品分別有1,2,2個(gè)實(shí)驗(yàn)成立的結(jié)果

(北京,天津和浙江所),合并計(jì)算生物效價(jià)每支為

55.515IU,59.347IU,68.695IU,可信限率為

9.72589/6,13.5850,11.5360;用S8絨促性

素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn),測(cè)得待標(biāo)品分別有2,2,3

個(gè)實(shí)驗(yàn)成立的結(jié)果(北京,天津和浙江所),合并計(jì)

算生物效價(jià)每支為53.713IU,58.141lid,55.914IU,

可信限率為7.0980,16.43809/6,11.3330.

4個(gè)實(shí)驗(yàn)室用第四批絨促性素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)

準(zhǔn),對(duì)第八批絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行標(biāo)定,生物效

價(jià)合并計(jì)算,結(jié)果不均一,經(jīng)校正權(quán)重計(jì)算,生物效

價(jià)每支為6O.548IU,可信限率為10.50,見(jiàn)表1.

表1標(biāo)定結(jié)果

用第四批絨促性素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn),對(duì)第九

批絨促性素國(guó)家待標(biāo)品進(jìn)行標(biāo)定,生物效價(jià)合并計(jì)

算,結(jié)果不均一,經(jīng)校正權(quán)重計(jì)算嘲,生物效價(jià)每

支為6O.5275IU,可信限率為9.05,見(jiàn)表2.

818中國(guó)藥事2007年第21卷第1O期

表2標(biāo)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)室被采用實(shí)驗(yàn)的序號(hào)(I效價(jià)

U/5~)

可率

北京市藥檢所1

2

3

4

天津市藥檢所

浙江省藥檢所

中國(guó)藥品生物

制品檢定所

合并計(jì)算結(jié)果均一

1

2

合并計(jì)算結(jié)果均一

1

2

3

4

合并計(jì)算結(jié)果均一

1

2

3

4

5

6

7

8

合并計(jì)算結(jié)果均一

-四個(gè)宴驗(yàn)竄結(jié)果的合并(校權(quán)螢)計(jì)算

12.653

14.024

11.964

7.3663

5.1572

22.398

22.946

15.885

13.716

10.049

19.719

24.172

7.0424

16.921

17.050

17.902

16.653

15.762

19.227

18.414

16.909

6.O018

9.O5

用第八批絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn)測(cè)得第九

批絨促性素國(guó)家待標(biāo)品的生物效價(jià)合并計(jì)算,結(jié)果

均一,生物效價(jià)每支為55.346IU,可信限率為

4.57,見(jiàn)表3.

表3標(biāo)定結(jié)果

2.2干燥失重測(cè)定

按《中國(guó)藥典》2005年版二部絨促性素檢查項(xiàng)

下,經(jīng)60~C真空減壓干燥,第九批絨促性素國(guó)家標(biāo)

準(zhǔn)品的干燥失重為3.42.

3討論

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,本批待標(biāo)品可作為第九批

絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品使用,批號(hào)為150513—200409.

根據(jù)合并計(jì)算和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品生物效價(jià)確定的原

則,第九批絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品生物效價(jià)是以第四

批絨促性素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn)測(cè)得的效價(jià)為依據(jù),

其他標(biāo)準(zhǔn)測(cè)得的效價(jià)為參考.本批標(biāo)準(zhǔn)品每支的生

物效價(jià)定為6O個(gè)國(guó)際單位.

絨促性素生物效價(jià)測(cè)定(33)法可靠性測(cè)驗(yàn)

結(jié)果分析中經(jīng)常出現(xiàn)二次曲線(xiàn),反向二次曲線(xiàn)或偏

離平行顯著(P<O.05或P<O.01)的情況,使得

實(shí)驗(yàn)失敗.本次協(xié)作標(biāo)定結(jié)果中也發(fā)現(xiàn)此問(wèn)題,主

要解決辦法是:(1)每次實(shí)驗(yàn)時(shí)一定要有1個(gè)空白

對(duì)照組,這樣可以與標(biāo)準(zhǔn)品的低劑量組動(dòng)物的反應(yīng)

值作比較,只要標(biāo)準(zhǔn)品的低劑量組動(dòng)物的反應(yīng)值

(子宮重me/體重g)稍大于(有明顯的差別)空白

對(duì)照組動(dòng)物的反應(yīng)值,說(shuō)明選擇的低劑量是有效劑

量,否則需要重新調(diào)節(jié)劑量.(2)實(shí)驗(yàn)中高,中,

低3個(gè)劑量的反應(yīng)值有時(shí)出現(xiàn)低和中劑量組反應(yīng)值

差的小,中和高劑量組反應(yīng)值差的大,這種情況是

由于實(shí)驗(yàn)劑距設(shè)計(jì)不合理所造成的,應(yīng)該重新調(diào)整

合適的劑距,如原來(lái)劑距是1:o.5,可調(diào)整為1:

o.6,使高,中,低3個(gè)劑量的反應(yīng)值能均勻地分

開(kāi),與標(biāo)準(zhǔn)品的高,中,低3個(gè)劑量引起的反應(yīng)值

相當(dāng),這樣可以提高實(shí)驗(yàn)的成功率.(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

的日齡,體重和管理,給藥部位,溶液配制等都會(huì)

影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,也應(yīng)該引起重視.

第八批絨促性素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品在一20"C保存18年,

本次經(jīng)用第四批絨促性素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn),4個(gè)

實(shí)驗(yàn)室標(biāo)定得每支生物效價(jià)為60.548IU,相當(dāng)于原

標(biāo)示量(每支57IU)的lO6,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,絨

促性素標(biāo)準(zhǔn)品在一20~C存放是穩(wěn)定的.

參考文獻(xiàn):

Ell孫愛(ài)龍,莊蘇星,彭士明.胎盤(pán)中人絨毛膜促性腺激素的提

取I-j].鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院,1997,7(4):405

E2]曾憲彪.高效價(jià)人絨毛膜促性腺激素精品提取純化[J].廣

西醫(yī)學(xué),1998,20(4):586

[3]羅金華,郭東平.人工流產(chǎn)物中提取絨促性素新工藝研究

I-J].中國(guó)生化藥物雜志,2003,24(4):200

[-43中國(guó)藥典[S].二部,2005:附錄103

I-s]冷煒.藥品的生物檢定[M].北京:氣象出版社,1995:104

[6]周海鈞,申蘊(yùn)如,朱承偉,等.生物檢定統(tǒng)計(jì)方法[M].北

京:人民衛(wèi)生出版社,1988:206

65845OO7976321725662S)5縱搦啪娜Ⅲ獬香;

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