培養基的配制方法

2024年3月6日發(作者：諸葛古鎮)

培養基的配制方法 實驗一培養基的配制

生科三班李林40608143 2008.9.16 周二上午

一.實驗目的：

1.明確配制微生物培養基的原理；

2.掌握配制微生物通用培養基的一般方法和操作步驟；

3.掌握是濕熱滅菌法的原理和操作。

二.實驗原理：

膏蛋白胨培養基是一種天然培養基。牛肉膏是牛肉浸液的濃縮物，含有豐富的營養物質，不僅能為微生物提供碳源、氮源，還含有多種維生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或魚粉等經過蛋白酶水解后，中間產物，含有胨和氨基酸等豐富的含氮素營養物，再加入的NaCl為細菌所需的無機鹽，加入的自來水可提供微量元素。

配置好的培養基用濕熱滅菌法進行滅菌。

三.材料和儀器：

1.試劑：牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，1mol/L NaOH,1mol/L HCl

2.器皿：臺秤，玻璃燒杯，搪瓷燒杯，三角瓶，量筒，沙漏，試管，玻棒等

3.其他：PH試紙，牛角匙，牛皮紙，棉花，沙繩，滅菌鍋等。

四.實驗步驟：

1.配方及配量：牛肉膏0.9g蛋白胨3g，氯化鈉 1.5g，瓊脂條

1

4.5g,水

300mL,PH7.2~7.4。

2.稱取藥品：按培養基配方及配量分別稱取各藥品，取少量水于燒杯中，將各

培養基成分（除瓊脂）逐一加入水中待溶。

3.加熱溶解：將搪瓷杯放到電熱爐上，用文火加熱，病不斷攪拌，促使各藥品

快速溶解，然后補充水分至所需培養基的量。

4.調節PH:初配好的牛肉膏蛋白胨，培養液是微酸性的，故需用1mol/L NaOH

調PH7.2~7.4。

5.加瓊脂：向調好的培養基中加入瓊脂條。

6.加棉塞：用8層紗布紙杯成通氣塞，滅菌前將方形紗布蓋在瓶口，將其中間

部位用手指塞入瓶口內，再將四角折疊成塞子狀后加紙套包扎好，然后滅菌。

7.包扎：在棉塞外再包上一層牛皮紙，以防滅菌時冷凝水直接沾濕棉塞及存放

中防止塵埃等污染。

8.滅菌：將待滅菌的培養基放入加壓滅菌鍋內，于121℃滅菌20min.

五.實驗結果：

2

按照實驗方法配制的培養基透明但有些發黃，說明說有物質均完全溶解，基本符合實驗要求，顏色有些發黃可能是因為加入牛肉膏，也可能是因為加入牛肉膏的時候所用火溫較高，使牛肉膏粘底了，稍有燒糊或燒焦了，致使培養基較黃。一周以后觀察, 配制的無菌牛肉膏蛋白胨固體培養基中,無菌落生成,說明配制的培養基符合要求.

六.思考題：配制牛肉膏蛋白胨斜面培養基有哪些操作步驟，哪幾步易出差錯?如何防止

答：配方及配量，稱取藥品，加熱溶解，調PH，加瓊脂，加棉塞，包扎，滅菌。易出差錯的步驟：

（1）稱藥品的牛角匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋，瓶蓋切莫張冠李戴，

尤其是易吸潮的蛋白胨等更應注意及時蓋緊瓶蓋與旋緊瓶蓋。

（2）調PH時要小心操作，盡量避免回調而帶入過多的無機離子。

（3）包扎時，在棉塞外再包上一層牛皮紙，以防滅菌時冷凝冰直接粘濕棉塞。

3