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            綿毛鹿茸草的次生代謝產物含量與抑菌活性分析

            更新時間:2024-03-02 09:33:37 閱讀: 評論:0

            2024年3月2日發(作者:二元性)

            綿毛鹿茸草的次生代謝產物含量與抑菌活性分析

            浙江中醫藥大學學報2oO9年3月第33巷第2期 綿毛鹿茸草的次生代謝產物含量與抑菌活性分析 楊蓓芬 一 崔敏燕! 1.浙江工業大學生環學院 杭州 3100l2 2.臺州學院生命科學學院 摘要:『目的:綿毛鹿茸草的次生代謝產物含量與抑菌活性分析。[方法]對綿毛鹿茸草不同提取液的總黃酮、總綠原酸、總生物 堿、總皂甙、游離蒽醌等次生代謝產物含量和抑菌活性進行測定。[結果]顯示:7o 乙醇提取液、6o 丙酮提取液對肺炎雙球 菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌有中等抑制作用,水提取液有弱抑制作用;7O 乙醇提取液是肺炎雙球菌、金黃色 葡萄球菌的良好抑制劑.6o 丙酮提取液是大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的良好抑制劑。[結論]綿毛鹿茸草提取掖對大腸桿菌的抑 茵活性與綠原酸的含量具有顯著的正性關,對枯草芽抱桿菌的抑菌活性與蒽醌之間存在極顯著的相關性。 關鍵詞:綿毛鹿茸草:次生代謝;抑茵活性 中圖分類號:R284.1 文獻標識碼:A文章編號:1OO 55O9(2OO9)O2 O265一O3 AnaIysis of the SecOndary Metabolisms Contents and Ant.bacterial ActiV.ty In the Different 0rgans 0f Monochasma SaVatierj Franch.ex Maxim Yang Beifen。。!.Cui Minyan! .C(J gP o/’B 0 0g f“ “ E,2 rI,訂Ⅲ ≠“z E g P r ng,Z^ , d”g U行 rs打 ,n廠丁 (^ 0 0一 gy,Hnngzh(’t{t 31oo14、;2.Ecu zf g lnsfitu£ oj Tuizhou Uni ersity Abstract:[()bjective]To analyse the c。ntent Of secondary metabolisms and antIbacteria1 activity of Monochasma savatieri Franch.ex Maxim.[Meth。djThe confen cs of 5 secondary metaboIites such as flav。noid,chiorogenic acid,tannin.phen0l and anthraquinones in the different extracts of MonochasIna savatieri Franch.ex Maxim were determined.[Results]It showed that the antibacterial act_、ri— ty of the liquids extracted with 7O ethanol,6O acetone on Streptoc。ccus pneuoncae,Staphyl0coccus aureus。Escherichia c。li and Bacil1 L1s subt|lis were moderate,wl1ile that of the 1iquids extracted with water was wea k.The liquids extracted with 7O ethanol were the better inhlbitor of Strcptococcus pneuoncae and Staphyl0coccus aureus,while the liquids extracted with 6O acet。ne were the bet— ter inhibitor of Escherichia col iand Baci1lus subtilis.:c0nclusion There was positive corre1ation between the antibactcria1 activity of the¨quids of Monochasma savatieri Franch.ex Maxim on Escherichia coli and the content of the ch0logenic acid.There was also marked correlati。n between that of Bail1us subtilis and anthra quinones. Key w0rds:monochasma Savatieri Franch.ex Maxim;secondary metabolism;ant|bacterial activity 綿毛鹿茸草(Mon。chasma savatieri Franch.ex Maxim)為唇形科鹿茸草屬植物,別名白頭翁、千重 采自浙江千島湖姥山林場的山坡上。采集時將棉毛 鹿茸草全草用濕布包裹,塑料袋封裝.立即帶回實驗 塔、白頭毛。分布于浙江、福建、江西,常生于山坡向 陽處雜草中或馬尾松林下 。主要功能為清熱解 室。將材料洗凈,防入1O5 C恒溫干燥箱中固定 25min,再在8O_C條件下干燥24h.研磨后經過 毒,祛風行氣,涼血止血.祛痰。用于感冒,慢性氣管 炎,肺炎,咳血,吐血。便血,牙齦炎,牙髓炎.乳癰,癰 腫,小兒口瘡,風濕關節痛等。本文對綿毛鹿茸草的 0.25mm金屬網篩,將烘干樣品放入磨口廣口瓶,置 于干燥器中保存,備用口]。標準品蘆丁、綠原酸、小 蘗堿、人參皂甙Rb,l,8一二羥基蒽醌購自中國藥品生 不同提取液中總黃酮、總綠原酸、總生物堿、總皂甙 及其對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯 草芽孢桿菌抑菌活性進行研究,并探討這五類次生 代謝產物與抑菌活性之間的相互關系。 1實驗與方法 物制品檢定所,所用試劑均為分析純。四種菌種均 由浙江臺州醫院無償贈送。培養基為牛肉膏培養 基。吸光度的測定在T6新世紀紫外一可見分光光 度計上完成。 1.2綿毛鹿茸草提取液的制備 稱取綿毛鹿茸草 1.1實驗材料和儀器 綿毛鹿茸草于2O07年6月 基金項目:臺州學院資助項目(No:O5ND】9) 粉末3份,每份1g,其中2份分別用7O 乙醇、60% Fund pr0ject:Item supported by Taizhou C0nege(N0:O5NDl9) 265 

            {喜斟 嘏~ 箍 離#僻墨 降t芑 浙江中醫藥大學學攝2O09年3目第33卷第2期 §跨峨打善鞋豫醉 丙酮在80 C水浴中回流6h,進行提取,離心取上清 酸.于70。C水浴加熱、20min,取出,冷卻,加5ml冰醋 液,并清洗殘渣2次,離心取上清液,將3次上清液合 酸,以試劑空白作對照,于560nm波長處測其吸光 并;另1份用沸水進行提取0.5h,離心取上清液,反 度。以人參皂甙Rb為標準品,其回歸方程為y一 復多次,直至提取液色淡,并將幾次沸水提取液混 27.763x+O.09O1,R。一O.97l6。 合。將乙醇、丙酮、沸水提取液的濃縮,并調節pH至 1.3.5游離葸醌的提取與測定 取上述綿毛鹿 7.O,然后用蒸餾水定容至1ml,放入4C的冰箱中待 茸草提取液樣品O.2ml,放人1oml離心管中,水浴蒸 用。 干溶劑,加人5 醋酸鎂乙醇溶液5ml,以試劑空白 1.3次生代謝產物含量的測定 為對照,在498nm處測定吸光度。以1,8二羥基蒽 1.3.1總黃酮的提取與測定【 取上述綿毛鹿茸 醌為標準品,其回歸方程為y==:47.464x+0.O0l2,R。 草提取液樣品0.2ml,揮去溶劑后用甲醇定容至 一O.9996。 25ml,取其中1ml,置1Oml離心管中,加入4ml 1.4抑菌活性的研究 以濾紙瓊脂擴散法測定綿 O.1mol/L三氯化鋁一甲醇溶液,搖勻,在420nm處 毛鹿茸草三種溶劑提取物對肺炎雙球菌、金黃色葡 測定吸光度。以蘆丁為標準品,其回歸方程為y一 萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑菌效果。將經 9.61O1x+0.O147,R 一0.9991。 過記數的菌液稀釋后,控制1O0 I 含1O4cfu,涂平 1.3.2總綠原酸的提取與測定 取上述綿毛鹿 板。將滅菌后濾紙片(直徑為6mm)浸泡在棉毛鹿茸 茸草提取液樣品O.2ml,揮去溶劑后用95 乙醇定 草提取液中。在已涂菌的平板上放置上述濾紙片, 容至25ml,取1ml,置25ml容量瓶中,加入0.2mol/ 并以蒸餾水為陰性,鏈霉素為陽性對照,每一樣品重 LHCl定容至刻度,搖勻,以試劑空白為對照,在 復3次。處理后的平板放在3OC培養24h,觀察并記 324nm處測定吸光度。以綠原酸為標準品,其回歸 錄抑菌圈的直徑大小 。 方程為y一66.O64x+0.O134, 一O.9995。 1.5數據的處理 試驗處理及數據測定均重復3 1.3.3 總生物堿的抽提與測定 j一 取上述綿毛鹿 次,將所得數據輸入SPSS11.5for wind0ws數據分 茸草提取液樣品0.2ml,揮去溶劑后用9O 乙醇定 析系統進行統計,并對次生代謝產物的含量與抑菌 容至25ml。取提取液1.4m1置于精密加入4ml氯仿 圈的大小進行相關分析。 的分液漏斗中,加入7.2×1O mol/I 溴甲酚綠pH 2結果與分析 一4.42緩沖溶液O.6m1,振搖1min,靜置1h,取澄清 綿毛鹿茸草不同提取液次生代謝產物含量以及 的氯仿液,以試劑空白作對照,于417nm處測定吸收 它們對四種細菌的抑菌圈大小如表l所示。其中次 度。以小檗堿為標準品,其回歸方程為y一6.6x一 生代謝產物的含量為百分含量,抑菌活性以抑菌圈 0.0102,R 一O.9999。 的大小(mm)表示,陰性對照抑菌圈直徑6mm,陽性 1.3.4 總皂甙的提取與測定 取上述綿毛鹿茸 對照(鏈霉素)抑菌圈26mm;抑菌圈直徑在6~8mm 草提取液樣品O.2m1,揮去溶劑后用甲醇定容至 為微弱抑菌,8~12mm為弱抑菌,12~2Omm為中等 25ml,取lml置25ml容量瓶中,揮去溶劑后,加入 抑菌,20~24mm為強抑菌。綿毛鹿茸草的的次生代 O.2m1 5 香草醛冰醋酸溶液,再加入0.8ml高氯 謝產物和抑菌圈直徑的相關性如表2所示。 表l 綿毛鹿茸草提取液次生代謝產物的含量(g/k窖)及其抑菌圈直徑(mm) 2.1綿毛鹿茸草提取液次生代謝產物含量和抑菌 對進肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用 活性分析 從表1中可以看出:總黃酮、總綠原酸、 均是60 丙酮提取液>70乙醇提取液>水提取液, 游離蒽醌三種次生代謝產物的含量均為7O 乙醇提 最大抑菌圈直徑為15.47mm和17.4Omm,為中等抑 取液>6O 丙酮提取液>水提取液,最高含量分別 菌作用;對大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用是7O乙 為1.403g/kg、72.752g/kg、0.O43g/kg;生物堿和皂 醇提取液>60 丙酮提取液>水提取液,最大抑菌 甙的含量為6O 丙酮提取液>70 乙醇提取液>水 圈直徑為19.O3mm和14.83mm,為中等抑菌作用。 提取液,最高含量為1.677g/kg和5.418g/kg。 水提取液對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿 266 

            浙江中醫藥大學學報2O()9年3月第3 巷第2期 菌、枯草芽孢桿菌的抑菌罔直徑均在9~l2mm之 用可能是提取液中的綠原酸起的作用;蒽醌與枯草 芽孢桿菌之間存在極顯著的相關性,說明綿毛鹿茸 草對枯草芽孢桿菌的抑制作用主要是蒽醌作用的結 果;肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌之間具有顯著的 間,具有弱抑菌作用。可以看出綿毛鹿茸革的7O 乙醇提取液和60 丙酮提取液是良好的抑菌劑。 2.2不同提取液的次生代謝產物含量與抑菌活性 的相關性分析 從表2可以看出:黃酮與葸醌之問 存在 著的正相關,推測綿毛鹿茸草中這兩種次生 代i身十產物可能具有相同的合成底物或具有相同代謝 相關性,而與所測的5種次生代謝產物之間都沒有 顯著相關性,因此推測綿毛鹿茸草中其它某些物質 對肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌均有一定抑制作 途徑;大腸桿菌的抑菌活性與綠原酸的含量具有顯 用。 著的正性關,推測綿毛鹿茸草對大腸桿菌的抑制作 表2 綿毛鹿茸草不同提取液的次生代謝產物含量與抑菌活性的相關性 總黃酮總綠原酸總皂甙 總生物堿 游離蒽醌肺炎雙球菌金黃色葡萄球菌大腸桿菌枯草芽孢桿菌 黃酮 l 綠原酸 O.98 l l 皂 O.989 O.918 1 生物堿 O.836 O.726 ().9O7 1 蒽醌 O.999 0.992 O.98l 0.8O9 1 肺炎雙球菌 0.9 O.829 O.946 O.986 O.895 l 金黃色葡萄球菌 O.9O6 ().818 O.9j8 O.99O O.88j 1.OOO 1 大腸桿菌 0.976 O.999 O.933 O.695 O.985 O.8O3 O.781 枯草芽孢桿菌 0.998 0.993 O.979 O.802 1.ooO— O.89O O.88O 水半硅著茇 :*』 <().(1 ,** t二0.【】l 3討論 參考文獻: 次生代謝是植物的重要特征.其產物既具有重 [1] 中國科學院植物研究所.中國高等植物圖鑒(第四冊) 要的生態學意義又可決定各類植物在進化過程中的 [M].北京:科學出版社,1 987:97. 興衰成敗、生死存亡等問題。。 .植物中的次生代謝產 [2] 何維明,鐘章成.絞股監種群次生代謝產物的動態及其 物還具有抗過敏、降血壓、抗炎、抗菌、抗突變、抗腫 生態學意義_J].云南植物研究,l998,2o( 4):434 438. [3]李鈞敏,金則新,楊蓓芬.云錦杜鵑總黃酮含量及成分分 瘤、抗病毒、抗氧化等多種活性。 析[J].西北林學院學報,2f)O4,19(1):11o一112. 綿毛鹿茸草對70 乙醇提取液、6O 丙酮提取 [4] 邢俊波,李萍,溫德良.不同物候期金銀花中總綠原酸的 液、水提取液對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸 積累動態研究[J].中國中藥雜志,2()(j1,26(7):456— 桿菌、枯草芽孢桿菌均有抑制作用,前兩者為中等抑 459. 制作用.后者為弱抑制作用;7O 乙醇提取液是肺炎 [5] 王沖之,孫健,李萍.貝母類藥材生物堿及生物堿苷含量 雙球菌、金黃色葡萄球菌的良好抑制劑,6O%丙酮提 測定方法學研究[J].中國藥學雜志,2f囂 離霹蔣詈7欠晦 薄 薯 l)()3.38(6):41活藩 蚤  7— 取液是大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的良好抑制劑。推 4l8. 測對大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用主要由提取液 [6] 宋永良.復方乳鴿膠囊中絞股藍總皂甙含量測定[J].浙 中的綠原酸和蒽醌引起的。 江中醫學院學報,2。(]2,26(3):77. 文獻查閱得知:金銀花中綠原酸的平均含量為 [7] 陳紅紅,黃麗玫.德慶等地巴戟天中蒽醌及多糖的含量 測定[J].廣東藥學院學報,2。O2,l8(2):1o3一l05. 56.92g?kg .巴戟天樣品的游離蒽醌含量為的 [8]王莘,蘇玉春,董浩,楊會敏,王建華.李金風.9種中藥 范圍為0.013~O.O49g?kg L 。綿毛鹿茸草7O 提取物對乙型溶血性鏈球菌的抑菌作用比較[J].中草 乙醇提取液中總綠原酸、游離蒽醌的含量72.752g? 藥,2。O4.35(3):3o9—31O. kg_。、0.O43g?kg 。從中不難看出:70 乙醇提取 [9]杜近義,胡國賦,秦際威.植物次生代謝產物的生態學意 液是綿毛鹿茸草的良好提取劑。至于綿毛鹿茸草中 義[J].生物學雜志,1999,16(5):9一lO. 這些次生代謝產物的分子組成、分子結構等方面內 (收稿日期 2O08一O9—22) 容有待進一步的研究。 267 科 斟 ● 稿 

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