抗菌實驗步驟方法

2024年3月6日發(作者：校友會章程)

抑菌實驗：待測菌金色葡萄球菌；枯草芽孢桿菌；大腸桿菌；綠膿桿菌

菌種活化：菌種，進行活化，可以劃線，也可以涂布，

劃線：直接用接種環在酒精燈上燒過之后，等之冷卻，蘸取進行劃線！

涂布：用槍頭吸取100ul的菌液涂布既可！本實驗采用涂布法

1.金色葡萄球菌最佳生長條件(過夜培養一般為12h)

2. 枯草芽孢桿菌培養條件（過夜培養）

3.綠膿桿菌最佳培養條件（14-17h）

培養基

MH（A）培養基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；瓊脂 12.5g

MH液體培養基配制方法：稱取本品36.5克，加入1000ml蒸餾水中，加熱煮沸溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鐘備用。

牛肉膏蛋白胨固體培養基（LB培養基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，瓊脂15g，NaCl 5 g，雙蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃滅菌20min。

牛肉膏蛋白胨液體培養基：不加瓊脂，其他同牛肉膏蛋白胨固體培養基。

菌懸液的配制

將冰箱保存的大腸桿菌移接到牛肉膏蛋白胨固體培養基上，置于37℃恒溫培養箱中培養24 h，用接種環挑取少許菌體與裝有無菌生理鹽水的試管中，震蕩均勻，制成菌懸液。具體為用接種環挑取一環（本實驗是吸取100uL菌懸液）于5 mL的無菌生理鹽水中，每10倍稀釋一次地逐級稀釋，取（10-8、10-9、10-10 、10-11）的濃度100μL做涂布實驗，每個梯度平行三組，加100μL藥品溶劑（二甲基亞砜）的空白對照3個平板，完全不加任何樣品即只是LB培養基的完全空白對照1個平板，調整菌懸液濃度，用平板菌落法測定其菌液濃度，使其含菌體數為103 cfu/mL，即為供試菌懸液。

抑菌作用初步篩選

將滅菌固體培養基加熱至熔化，待冷卻至50℃時，每20ml培養基倒入無菌培養皿中。待平板自然晾干后，分別移取0.1ml待測藥品，0.1 mL供試菌懸液，均勻涂布于加藥平板上，每個處理3次重復。(涂布30min后再倒置)另設置對照組，涂菌，以等量無菌水（溶解藥品物質）代替藥液。上述操作在超凈工作臺內進行。將做好的細菌平板在37℃恒溫培養24 h，統計菌落個數，按照下式計算抑菌率。

抑菌率?對照菌落數?處理菌落數?100%

對照菌落數實驗結果表示為：平均數±標準誤差（Mean±SDE）。

菌種活化：37℃培養；約24H

挑取兩環于50ml 液體培養基上活化：先恒溫150r/min震蕩12h,再靜置培養8-12h。達到穩定期后，4度保藏，備用。

生理鹽水：8.5gNaCl加入到1000ml 蒸餾水中，121度高壓蒸汽滅菌15-20min即可。