蛋白酶的分類及酶切位點

2023年12月12日發(作者：初五迎財神祝福語)

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蛋白酶的分類及酶切位點

蛋白酶

氨基肽酶

分類

金屬蛋白酶

酶切位點 已知抑制物

帶有自由氨基的L-氨基酸氨2，2，雙吡啶，1．1()-菲咯啉

基末端；不能分解由X-Pro、D或Q組成的肽鍵

菠蘿蛋白酶

羧肽酶A

巰基蛋白酶 無特異性 α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化

鋅金屬蛋白酶 帶有自由氨基酸的L-氨基酸EDTA，EGTA

羧基端；不能分解R、P或羥脯氨酸

羧肽酶B

羧肽酶Y

鋅金屬蛋白酶 K，R羧基端

絲氨酸羧肽酶 氨基酸羧基端

EDTA，EGTA，堿性氨基酸

PMSF

組織蛋白酶C 琉基蛋白酶 氨基端雙肽，可通過K，R或醋酸碘， 甲醛

P氨基端作為第二或第三個氨基酸封閉

胰凝乳蛋白酶 絲氨酸蛋白酶 在F，T或Y之后

膠原酶

dispa

金屬蛋白酶

金屬蛋白酶

在P-X-G-P肽鏈中X之后

無特異性

抑肽酶，PMSF，TPCK，α-巨球蛋白

EDTA，EGTA，還原劑，但無血清存在

EDTA，EGTA，Hg2+，重金屬

α巨球蛋白，TLCK

EDTA，α菲咯啉

α巨球蛋白，TLCK

TLCK，抑肽酶，抑蛋白酶醛肽

內肽酶Arg-C 絲氨酸蛋白酶 在R之后

內肽酶Asp-N 金屬蛋白酶 在D和半胱氨酸之前

內肽酶Glu-C 絲氨酸蛋白酶 在E或D之后

內肽酶Lys-C 絲氨酸蛋白酶 在K之后

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腸激酶 絲氨酸蛋白酶 在D-D-D-D-K-肽鏈中K之

后

Xa因子 絲氨酸蛋白酶 在R之后

無特異性

PMSF，APMSF，大豆胰蛋白酶抑制物

TPCK，TLCK，α-巨球蛋白

抑肽酶，抑蛋白酶醛肽

無花果蛋白酶 琉基蛋白酶

激肽釋放酶

木瓜蛋白酶

絲氨酸蛋白酶 在一些R之后

巰基蛋白酶 長期孵育時具有廣泛特異性 TPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽α-巨球蛋白，烷化劑

胃蛋白酶

纖溶酶

鏈霉蛋白酶

蛋白酶K

酸蛋白酶 廣泛特異性 胃蛋白酶抑制素

PMSF，TLCK，抑肽酶，α-巨球蛋白

B．M．完整藥片

PMSF，PefablocSc

PMSF，α巨球蛋白，苯甲脒

EDTA

TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽抑肽酶，α巨球蛋白，苯甲脒

絲氨酸蛋白酶 在K或R之后

混合型 無特異性

絲氨酸蛋白酶 廣泛特異性

枯草桿菌蛋白酶 絲氨酸蛋白酶 無特異性

熱溶素

凝血酶

鋅金屬蛋白酶 在非極性殘基之前

絲氨酸蛋白酶 在K之后

胰蛋白酶 絲氨酸蛋白酶 在K或R之后 TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽抑肽酶，α巨球蛋白

氨基酸

氨基酸的名稱與符號

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alanine 丙氨酸 Ala A

R

N

D

arginine 精氨酸 Arg

asparagine 天冬酰氨

aspartic acid 天冬氨酸

cysteine 半胱氨酸

Asn Asx

Asp Asx

C Cys

glutamine 谷氨酰胺

glutamic acid

glycine

histidine

Gln Glx Q

E 谷氨酸 Glu Glx

G

H

I

L

K

M

F

甘氨酸

組氨酸

Gly

His

Ile

Leu

Lys

Met

isoleucine 異亮氨酸

leucine

lysine

亮氨酸

賴氨酸

methionine 甲硫氨酸

phenylalanine

proline

rine

threonine

苯丙氨酸 Phe

P

S

T

W

Y

V

脯氨酸

絲氨酸

蘇氨酸

Pro

Ser

Thr

Trp

Tyr

Val

tryptophan 色氨酸

tyrosine 酪氨酸

valine

血清終止胰酶消化的原理

纈氨酸

血清終止的原理其實是競爭抑制。就是用過量的牛血清中含有的蛋白來和胰酶結合。不給胰可編輯 -------------精選文檔-----------------

酶消化細胞蛋白的機會。

細胞傳代時，血清為什么能終止胰酶消化？

胰蛋白酶的酶切位點是肽鏈的Lys和Arg兩個殘疾的羧基端肽鍵，血清的加入可使酶飽和，嚴格上說不是競爭性抑制，因為血清蛋白不是抑制劑，還是底物！

什么樣的細胞不能用胰酶-EDTA消化

植物細胞不能用胰酶-EDTA消化，要用纖維素酶消化。

應該是腫瘤細胞吧。正常的細胞，貌似都需要用胰酶或者膠原酶消化。

EDTA-胰酶，只不過是在胰酶里加入了EDTA而已。

EDTA是乙二胺四乙酸，一種金屬螯合劑。一般和胰蛋白酶配合使用。原因在于，鈣，鎂等金屬離子會降低胰酶活力，故在使用胰酶消化液時要配合加入EDTA。它可以螯合這些離子，消除對胰酶的抑制。

干細胞飼養層制作中，胰酶—EDTA消化成纖維細胞（MEF）時，EDTA的作用是什么？

應該是胰酶分散細胞，EDTA鰲合金屬離子使金屬酶失活

《軍醫進修學院學報》 1992年02期

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正常人血漿蛋白酶解產物對胃癌細胞肺轉移抑制作用的研究

焦順昌 趙東海 黃昌霞 王洪海

【摘要】：本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶聯合消化方法得到正常人血漿(NHP)有限蛋白酶解產物(NHP-EP)。體外研究發現,NHP的細胞粘附性可達90％;而NHP-EP的細胞粘附可編輯 -------------精選文檔-----------------

抑制性亦可達90％以上,具有可逆性、競爭性、非細胞毒性等特點。動物實驗發現,NHP-EP可抑制小鼠胃癌細胞實驗性肺轉移的形式,抑制率達83.3％;并可延長帶瘤小鼠的中位生存期,實驗組生存期35天,而對照組為19天。我們認為,NHP-EP對胃癌血行轉移防治可能有較大實用價值。

【作者單位】：

【關鍵詞】： 正常人血漿蛋白酶解產物 胃腫瘤 肺腫瘤 癌癥 腫瘤轉移 細胞粘連

【正文快照】：

腫瘤轉移的各個環節均有賴于癌細胞活躍的游走、與基質的粘附和去粘附等生物學功能田。體內有多種介導細胞—基質粘附的蛋白質,常見的有纖維連接素(fi bronectin,FN)、層粘素(laminin,LN)、膠原、Vitro-neetin等,它們與腫瘤轉移有關(2,’〕。其中FN與細胞結合位點的氨基酸序

《癌癥》 1993年02期

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纖維連接素酶解產物的生物學特性及其對胃癌細胞血行轉移抑制作用的初步研究

焦順昌 趙東海 黃昌霞 王洪海

【摘要】：本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶聯合降解方法得到正常人血漿纖維連接素有限蛋白酶解產物(FN—EP)。體外研究發現,纖維連接素的細胞粘附率可達60％以上;而FN—EP的細胞粘附抑制率可達90％,具有可逆性、競爭性、非細胞毒性等特征。動物實驗初步顯示,FN—EP可抑制小鼠胃癌細胞實驗性肺轉移的形成,抑制率達78.6％。本研究提示,FN—EP在惡性腫瘤血行轉移防治中具有應用價值。

【作者單位】： 解放軍總醫院 解放軍總醫院 解放軍總醫院 解放軍總醫院

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【關鍵詞】： 血漿 纖維連接素酶解產物 細胞粘附 腫瘤轉移

【正文快照】：

纖維連接素(Fibroneetin,FN)通過介導癌細月包一胞外基質粘附,在腫瘤轉移中發揮重要作用〔’,”〕。FN與細胞結合位點的氨基酸序列為RGD(即精氨酸一甘氨酸一天門冬氨酸)。Hum分hr ies〔3,‘〕等用人工合成的含RGD序列的GRGDS多肚成功地抑制了黑色素瘤細胞實驗性小鼠肺轉移,抑

臺研究發現Pif1解旋酶蛋白質 殺死癌細胞有轉機

2013年09月13日 15:32 來源：中國新聞網 參與互動(0)

中新網9月13日電 據臺灣東森電視臺網站報道，修復受損癌細胞的謎題逐漸解開。臺灣大學生化所發現細胞內一種“Pif1解旋酶”蛋白質，能在癌細胞基因受損時，促進DNA間的重組，進而修復細胞。醫師指出，無論是正常細胞或是癌細胞都擁有Pif1，未來有機會借由抑制癌細胞中的Pif1，開發抗癌新藥物。

臺大生化所助理教授冀宏源帶領的研究團隊3年前開始與美國貝勒醫學院、耶魯大學等知名學校合作，成功從酵母菌中找到細胞里的Pif1解旋酶。冀宏源表示，DNA受損的形態中，最嚴重的就是雙股DNA斷裂，團隊利用酵母菌、蛋白質純化技術，發現Pif1可解開雙股DNA結構，幫助它的重組，完成細胞修復。

這項發現成為治療癌癥的重大突破，也登上國際知名期刊《自然》(Nature)。2年前海外實驗更證實，若在乳癌細胞株上注射Pif1抑制劑，降低癌細胞存活率的效果高達10倍。臺大校長楊泮池表示，下一階段研究重點是透過臨床試驗，盡快找到對Pif1活性敏感的癌癥種類。

標簽：癌細胞 酵母菌 冀宏源 解旋酶 細胞

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阻斷細胞內“通訊線路” 抑制腎癌細胞增殖

2013年08月19日 08:26 來源：揚子晚報 參與互動(0)

腎癌又稱腎細胞癌，腎腺癌，多起源于腎小管上皮細胞。早期癥狀不明顯，等到出現“無痛性的血尿、腰部腫塊、腰痛”三聯癥時，腫瘤多已進展到中晚期。江蘇省腫瘤醫院馮繼鋒教授告訴記者，靶向藥物是治療腎癌的最重要手段之一，但實際上腫瘤細胞非常“聰明”，會自我“進化”，用藥一段時間后就有耐藥的可能，所以不斷尋找新的有效的治療方法，就成了臨床及科研人員的研究熱點。

馮繼鋒教授表示，和其他癌癥有所不同的是，腎癌對放療、化療、免疫或是激素治療相對不敏感。而對晚期患者來講，靶向藥物一直是主要的治療手段。現代的醫學研究表明，基因的變異會左右腫瘤的發展，而這一因果關系的發生需要依靠腫瘤細胞內的信號的傳導，有了信號的傳遞，腫瘤相關的生長因子才會被“激活”。

“哪些基因變異起主要作用？哪些通路是腫瘤的發生、發展、轉移的關鍵因素？科學的研究還有很長的一段路要走，但目前也尋找到了若干可以作用的靶點，由此也誕生了一些靶向藥物。”馮繼鋒教授告訴記者，用特殊的藥物將這個關鍵的靶點“封掉”，腫瘤細胞內的“通訊線路”就被阻斷了，細胞核接收不到信息無法分裂增殖，自然達到了抑制腫瘤的目的。

“不過，腫瘤細胞比我們想的要‘聰明’得多。”馮繼鋒教授說，腫瘤內傳遞信號的通路非常復雜，像網絡一樣。而且腫瘤細胞會隨著給藥時間的延長，腫瘤發生發展的機制也有所改變，比如信號在一條“通訊線路”上走不通，漸漸地就走上了別的“岔道”，繼續將信號傳遞下去。表現在病人身上就是出現了耐藥性，原先有效的藥物不再起作用了，病情會進一步進展。“但是腎癌患者也不必過分灰心。”即使是產生了耐藥性的患者，也可以陸續受益于新的治療方法。比如以往接受過舒尼替尼或索拉非尼治療失敗的晚期腎細胞癌的患者，可編輯 -------------精選文檔-----------------

現在就可以使用靶向藥物mTOR抑制劑依維莫司片進行治療。腫瘤基礎研究和治療新技術、新藥物研發應用的進步，讓很多以往失去治療機會的患者多了選擇。楊彥 整理

標簽：通訊線路 腎癌 細胞內 腎細胞癌 mTOR

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