作者：李玉萍，曾憲偉 ，葉軍，蘇虎 ,劉華，周春麗
【摘要】 目的觀察馬齒莧活性成分對(duì)人肺腺癌細(xì)胞系(a-549 cell)、人喉表皮樣癌細(xì)胞系(hep-2 cell)、人宮頸癌細(xì)胞系(hela cell)和人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞系（rd cell）生長(zhǎng)的影響。方法體外培養(yǎng)條件下用不同濃度的馬齒莧活性成分處理4種癌細(xì)胞，通過(guò)溴化二甲噻唑二苯四氮唑（mtt）試驗(yàn)法測(cè)定癌細(xì)胞的增殖；同時(shí)處理s180荷瘤小鼠，觀察荷瘤小鼠的體重、瘤重、死亡率和抑瘤率。結(jié)果馬齒莧生物堿對(duì)離體培養(yǎng)的a-549肺癌細(xì)胞、hela細(xì)胞和hep-2細(xì)胞的增殖均具有明顯抑制作用,馬齒莧多糖對(duì)hela細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用, 馬齒莧脂肪酸對(duì)hep-2細(xì)胞有一定的抑制作用，馬齒莧黃酮對(duì)rd細(xì)胞有很強(qiáng)的抑制作用，并存在濃度劑量效應(yīng)，高濃度抑制作用強(qiáng)。結(jié)論馬齒莧活性成分能選擇性地殺傷癌細(xì)胞，有進(jìn)一步研究的潛在價(jià)值。 【關(guān)鍵詞】 馬齒莧； 活性成分； 溴化二甲噻唑二苯四氮唑試驗(yàn)； 抗腫瘤活性
1 儀器與材料
1.1 儀器與試劑rpmi 1640培養(yǎng)液：美國(guó)gibco公司產(chǎn)品；胎牛血清（fbs）：杭州四季青生物
工程有限公司產(chǎn)品； 溴化二甲噻唑二苯四氮唑 (mtt)、胰蛋白酶和二甲基亞砜(dmso)為amresco公司產(chǎn)品；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純(國(guó)藥集團(tuán))。倒置熒光顯微鏡(ix-71)：日本olympus產(chǎn)品；二氧化碳培養(yǎng)箱(thermo forma ries-ii，美國(guó) thermo scientific，forma公司)產(chǎn)品；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(multiscan mk3, labsystems公司)產(chǎn)品。
1.2 材料新鮮馬齒莧portulaca oleracea l.于2005-09購(gòu)于江西省南昌市農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，經(jīng)本校藥學(xué)院藥 理學(xué) 教研室鑒定。用清水洗凈，瀝干水分，60℃鼓風(fēng)干燥6 h，粉碎備用。稱取上述備用馬齒莧干粉50 g，加蒸餾水（按1∶30的比例分3次加蒸餾水），煮沸后煎20 min，取其上清液減壓濃縮使其生藥濃度為2 g/l，得粗提取液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｍ瑫r(shí)，稱取相同重量的馬齒莧干粉，分別采用周晶［4］、上官新晨［5］、黃阿根［6］等的方法提取馬齒莧粗多糖、不飽和脂肪酸、生物堿、黃酮及定量，所得樣品4℃干燥保存?zhèn)溆?。臨用時(shí)配制使用。
2 方法
2.1 細(xì)胞株及體外抑瘤作用觀察
2.1.1 腫瘤株選用人肺腺癌細(xì)胞(a-549 cell)和人宮頸癌細(xì)胞(hela cell) 由南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬 醫(yī)院 細(xì)胞研究室友情提供，人喉表皮樣癌細(xì)胞(hep-2 cell)和人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞（rd cell）由江西省疾控中心友情提供。
2.1.2 馬齒莧活性成分對(duì)a-549 細(xì)胞生存能力的影響選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的a-549細(xì)胞，用0.25％胰蛋白酶消化后，用含10％fbs的rpmi1640培養(yǎng)液制成5×104個(gè)細(xì)胞/ ml，接種于96孔板中培養(yǎng)24 h后， 吸去上清液。陰性對(duì)照組加入同體積的未添加馬齒莧活性成分的培養(yǎng)液；實(shí)驗(yàn)組分別加入含有終濃度為10， 50， 100， 200 μg/m1的總提取液、多糖、不飽和脂肪酸、生物堿、黃酮的培養(yǎng)液處理4 h后，更換培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24 h，采用mtt法間接測(cè)定癌細(xì)胞生存能力［7］，按公式 計(jì)算 其抑瘤率。抑瘤率(％)=［(對(duì)照組a值一實(shí)驗(yàn)組a值)／對(duì)照組a值］×100%。
2.1.3 馬齒莧活性成分對(duì)hep-2細(xì)胞、hela細(xì)胞和rd細(xì)胞的作用實(shí)驗(yàn)方法與“2.1.2”項(xiàng)基本相同，不同之處是：取指數(shù)生長(zhǎng)期的hep-2 cell、rdcell和hela cell，用含10% fbs的dmem培養(yǎng)液配制成1×105個(gè)細(xì)胞/ml懸液，接種于96孔板中，隨后的處理同“2.1.2”項(xiàng)。
2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及體內(nèi)抑瘤作用觀察
2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤株昆明種小鼠，雌雄各半，5周齡，體質(zhì)量19～23 g，由江西省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)：021-97-03)，一級(jí)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)小鼠肉瘤s180腹水型瘤株由江西省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
2.2.2 小鼠s180實(shí)體瘤模型建立與分組s180肉瘤細(xì)胞接種選擇接種s180細(xì)胞后1周的小鼠脫頸椎處死，無(wú)菌條件下抽取腹水，用生理鹽水調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至1×107 個(gè)細(xì)胞/ml。以每只小鼠0.2 ml接種于小鼠右腋下皮下。將動(dòng)物隨機(jī)分為6組，每組6只，其中一組為陰性對(duì)照組，其余5組為實(shí)驗(yàn)組。
2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，計(jì)量資料用方差分析法分析，用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理。p<0.05被認(rèn)為兩變量之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。
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